Το οξικό λιπαρό οξύ βραχείας αλυσίδας που χορηγείται από τους αεραγωγούς ενισχύει την αντιική ανοσία κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από ρινοϊό

Ιστορικό: 

Η μικροχλωρίδα αναγνωρίζεται ότι παίζει σημαντικό ρόλο στη ρύθμιση της ανοσίας μέσω της απελευθέρωσης ανοσοτροποποιητικών μεταβολιτών όπως τα λιπαρά οξέα βραχείας αλυσίδας (SCFAs). Οι ρινοϊοί (RVs) προκαλούν ασθένειες της ανώτερης αναπνευστικής οδού και επισπεύδουν τις παροξύνσεις του άσθματος και της χρόνιας αποφρακτικής πνευμονοπάθειας μέσω ελάχιστα κατανοητών μηχανισμών. Οι τοπικές αλληλεπιδράσεις μεταξύ των SCFAs και των αντιικών ανοσοαποκρίσεων στην αναπνευστική οδό δεν έχουν διερευνηθεί προηγουμένως.

Τα λιπαρά οξέα βραχείας αλυσίδας (SCFAs) είναι οργανικά οξέα που παράγονται από τη ζύμωση κυτταρίνης και άλλων διαιτητικών ινών από ωφέλιμα βακτήρια στο έντερο. Μελέτες έχουν δείξει ότι τα SCFA έχουν σημαντικό αντίκτυπο στο ανθρώπινο ανοσοποιητικό σύστημα.

Πρώτον, τα SCFAs μπορούν να προάγουν την ακεραιότητα του φραγμού του εντερικού βλεννογόνου και να ενισχύσουν τη λειτουργία του εντερικού φραγμού. Ο εντερικός φραγμός είναι η πρώτη γραμμή άμυνας για την προστασία του εντερικού περιβάλλοντος. Εάν ο εντερικός φραγμός καταστραφεί, επιβλαβείς ουσίες μπορούν να εισέλθουν στο σύστημα κυκλοφορίας του αίματος μέσω του εντερικού τοιχώματος, προκαλώντας φλεγμονή και ανώμαλο ανοσοποιητικό σύστημα. Μελέτες έχουν βρει ότι τα SCFA μπορούν να ενισχύσουν την ακεραιότητα του εντερικού φραγμού και να μειώσουν τον κίνδυνο εντερικής φλεγμονής προάγοντας τη διαφοροποίηση και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του βλεννογόνου, αυξάνοντας το πάχος του βλεννογόνου και την παραγωγή βλέννας.

Δεύτερον, τα SCFA έχουν τη λειτουργία της ρύθμισης των κυττάρων του ανοσοποιητικού. Μελέτες έχουν δείξει ότι τα SCFAs μπορούν να προάγουν τη διαφοροποίηση και τον πολλαπλασιασμό των κυττάρων του ανοσοποιητικού και να ρυθμίζουν τη λειτουργία των ανοσοκυττάρων. Τα SCFA μπορούν επίσης να μειώσουν την παραγωγή φλεγμονωδών κυτοκινών και να αναστείλουν τη δραστηριότητα των ανοσοκυττάρων, προστατεύοντας έτσι το ανθρώπινο ανοσοποιητικό σύστημα. Άλλες μελέτες έχουν επίσης βρει ότι τα SCFAs μπορούν να ρυθμίσουν τη λειτουργία των Τ κυττάρων, να αυξήσουν την αυτοάνοση λειτουργία και να διαδραματίσουν έναν ορισμένο ρόλο στην πρόληψη και τη θεραπεία αυτοάνοσων ασθενειών.

Εν ολίγοις, τα λιπαρά οξέα βραχείας αλυσίδας παίζουν σημαντικό ρόλο στη φυσιολογική λειτουργία του ανθρώπινου ανοσοποιητικού συστήματος. Θα πρέπει να δώσουμε προσοχή σε έναν εύλογο συνδυασμό διατροφικής δομής, πλούσιου σε διαιτητικές ίνες, για να αυξήσουμε τον αριθμό και την ποικιλία των ωφέλιμων βακτηρίων στα έντερα, προάγοντας έτσι την παραγωγή SCFAs και διατηρώντας τη σταθερότητα και την υγεία του ανθρώπινου ανοσοποιητικού συστήματος. Από αυτή την άποψη, πρέπει να βελτιώσουμε το ανοσοποιητικό μας. Το Cistanche μπορεί να βελτιώσει σημαντικά την ανοσία, επειδή το Cistanche είναι πλούσιο σε μια ποικιλία αντιοξειδωτικών ουσιών, όπως βιταμίνη C, βιταμίνη C, καροτενοειδή κ.λπ. Αυτά τα συστατικά μπορούν να καθαρίσουν τις ελεύθερες ρίζες και να μειώσουν το οξειδωτικό στρες. Διεγείρει και βελτιώνει την αντίσταση του ανοσοποιητικού συστήματος.

Κάντε κλικ στα οφέλη του σωληνίσκου cistanche

Σκοπός:

Επιδιώξαμε να διερευνήσουμε εάν ο χειρισμός του πνευμονικού μεταβολίτη μέσω της χορήγησης SCFA που χορηγείται στον πνεύμονα μπορεί να ρυθμίσει την αντιική ανοσία στη μόλυνση από RV.

Μέθοδοι:

Μελετήσαμε τις επιδράσεις της ενδορρινικής χορήγησης των οξικών, βουτυρικών και προπιονικών SCFA στη βασική έκφραση των αντιικών υπογραφών και του οξικού σε ένα μοντέλο ποντικού μόλυνσης από RV και σε επιθηλιακές κυτταρικές σειρές πνεύμονα μολυσμένες με RV. Επιπροσθέτως, αξιολογήσαμε τις επιδράσεις του οξικού, βουτυρικού και προπιονικού στη μόλυνση από RV σε διαφοροποιημένα ανθρώπινα πρωτογενή επιθηλιακά κύτταρα των βρόγχων.

Αποτελέσματα:

Η ενδορινική χορήγηση οξικού προκάλεσε βασική ανοδική ρύθμιση της IFN-b, μια επίδραση που δεν παρατηρήθηκε με άλλα SCFA. Έκφραση RIG-I που προκαλείται από βουτυρικό. Η ενδορινική αγωγή με οξικό άλας των ποντικών αύξησε το διεγερμένο από ιντερφερόνη γονίδιο και την έκφραση της IFN-l κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από RV και μείωσε τα φορτία του ιού του πνεύμονα 8 ώρες μετά τη μόλυνση. Το οξικό άλας βελτίωσε τις προφλεγμονώδεις αποκρίσεις που προκαλούνται από τον ιό με εξασθενημένη πνευμονική βλεννίνη και έκφραση IL-6 που παρατηρήθηκε στις ημέρες 4 και 6 μετά τη μόλυνση. Αυτή η δράση ενίσχυσης της ιντερφερόνης του οξικού επιβεβαιώθηκε σε ανθρώπινες βρογχικές και κυψελιδικές επιθηλιακές κυτταρικές σειρές. Σε διαφοροποιημένα πρωτογενή βρογχικά επιθηλιακά κύτταρα, η θεραπεία με βουτυρικό ρυθμίζει καλύτερα την έκφραση των γονιδίων IFN-b και IFN-l κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από RV.

Συμπεράσματα:

Τα SCFA αυξάνουν την αντιική ανοσία και μειώνουν το φορτίο του ιού και τις προφλεγμονώδεις αποκρίσεις κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από RV. (J Allergy Clin Immunol 2023;151:447-57.)

Οι μόνιμες κοινότητες βακτηρίων που υπάρχουν στις επιφάνειες του βλεννογόνου (μικροβίωση) διαδραματίζουν κεντρικό ρόλο στην ομοιόσταση του ανοσοποιητικού και υπαγορεύουν την απόκριση σε φλεγμονώδεις και μολυσματικές καταστάσεις, όπως το άσθμα, η κολίτιδα και οι βακτηριακές και ιογενείς λοιμώξεις.1-5 Βακτηριακούς μεταβολίτες όπως βραχείας αλυσίδας. Τα λιπαρά οξέα (SCFAs), κυρίως το οξικό, το βουτυρικό και το προπιονικό, είναι πλέον ένας καλά αναγνωρισμένος σύνδεσμος μεταξύ της μικροχλωρίδας του εντέρου και των κυττάρων-ξενιστών.6,7 Αυτά τα μόρια παράγονται μέσω του μεταβολισμού των διαιτητικών ινών από συστατικά της εντερικής μικροχλωρίδας. Τα SCFA έχουν τόσο τοπικές όσο και συστημικές επιδράσεις. Ρυθμίζουν την ενεργοποίηση και τη λειτουργία των ανοσοκυττάρων μέσω μηχανισμών που περιλαμβάνουν την ενεργοποίηση των συζευγμένων με πρωτεΐνη G υποδοχέων (π.χ. Gpr41, Gpr43 ή Gpr109a) και την αναστολή των αποακετυλασών ιστόνης και έχει αποδειχθεί ότι προάγουν την ομοιόσταση του βλεννογόνου και την ανοχή του στόματος. Πιο πρόσφατα, η ύπαρξη μικροχλωρίδας στην κατώτερη αναπνευστική οδό έχει περιγραφεί και τα αναδυόμενα στοιχεία υποδεικνύουν ότι τα αναπνευστικά αναπνευστικά είναι επίσης μεταβολικά ενεργοί οργανισμοί ικανοί να παράγουν μεταβολίτες με ανοσοτροποποιητική ικανότητα όπως SCFAs. που προέρχεται από τη μικροχλωρίδα του εντέρου μπορεί να διαδραματίσει εξέχοντα ρόλο στη ρύθμιση της ανοσίας. Ωστόσο, η αντιική δράση των SCFAs έναντι των ρινοϊών (RVs) είναι άγνωστη.

Τα RV είναι υπεύθυνα για ένα τεράστιο βάρος μολυσματικών ασθενειών παγκοσμίως, πυροδοτώντας ήπια αυτοπεριοριζόμενα κρυολογήματα σε υγιή άτομα και επισπεύδοντας παροξύνσεις σε άτομα με χρόνιες πνευμονικές παθήσεις όπως το άσθμα ή η χρόνια αποφρακτική πνευμονοπάθεια (ΧΑΠ). Αυτές οι ασθένειες συνεπάγονται σημαντικό οικονομικό κόστος στις υποδομές υγειονομικής περίθαλψης παγκοσμίως. Επί του παρόντος δεν υπάρχουν αποτελεσματικές θεραπείες ή εγκεκριμένα εμβόλια για RV, επειδή η μεγάλη ποικιλία οροτύπων/στελών έχει θέσει σημαντικές προκλήσεις για την έρευνα.9 Επομένως, απαιτείται επειγόντως η ανάπτυξη νέων προληπτικών και θεραπευτικών προσεγγίσεων για τις λοιμώξεις από RV. Το μικροβίωμα του εντέρου μπορεί να χειραγωγηθεί θεραπευτικά για να προσφέρει κλινικά οφέλη για εντερικές μολυσματικές ασθένειες (π.χ. Clostridium difficile). Η δυνατότητα χορήγησης αναπνευστικών παραγόντων ή σχετιζόμενων μεταβολιτών για παρόμοια ενίσχυση της πνευμονικής αντιμικροβιακής ανοσίας παραμένει ανεξερεύνητη.10

Έχουμε αποδείξει προηγουμένως ότι η χορήγηση δίαιτας υψηλής περιεκτικότητας σε φυτικές ίνες ή οξικών, βουτυρικών και προπιονικών SCFA προστάτευσε ποντίκια από λοίμωξη από τον αναπνευστικό συγκυτιακό ιό (RSV). ISG) στον πνεύμονα κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από RSV. Επιπλέον, διαπιστώσαμε ότι το οξικό που χορηγείται απευθείας στους αεραγωγούς προστατεύει από τη μόλυνση από RSV μέσω της αυξανόμενης έκφρασης των ISGs στον πνεύμονα.11 Επομένως, υποθέσαμε ότι η άμεση χορήγηση οξικού στην αναπνευστική οδό, για την ενίσχυση των τοπικών συγκεντρώσεων μικροβιακού μεταβολίτη, θα είχε παρόμοια προστατευτική δράση επιπτώσεις στη μόλυνση από RV. Εδώ, δείχνουμε ότι η in vivo χορήγηση οξικού σε ποντίκια αυξάνει τις αντιιικές ιντερφερόνες τύπου Ι και τύπου ΙΙΙ (IFN), μειώνει την αναπαραγωγή του RV και εξασθενεί την επαγόμενη από τον ιό ανοσοπαθολογία. Όταν εξετάζουμε την in vitro αντιϊκή απόκριση συγκεκριμένων τύπων κυττάρων σε ένα ευρύτερο φάσμα SCFAs, διαπιστώνουμε ότι αυτές οι ενώσεις δεν επηρεάζουν τις αποκρίσεις IFN των κυψελιδικών μακροφάγων και έχουν διαφορικές επιδράσεις στο επιθήλιο, με πιο εμφανή αντιική δράση ενίσχυσης που παρατηρείται με το βουτυρικό σε σύγκριση με άλλα SCFA, υποδηλώνοντας ότι τα in vivo επιδράσεις μπορεί να οφείλονται σε πιο σύνθετες αλληλεπιδράσεις κυττάρου-κυττάρου. Αυτά τα δεδομένα υποδηλώνουν ότι ο χειρισμός του περιβάλλοντος πνευμονικού μικροβιακού μεταβολίτη θα μπορούσε να αντιπροσωπεύει μια νέα προσέγγιση για την πρόληψη ή τη θεραπεία των αναπνευστικών ιογενών λοιμώξεων.

ΜΕΘΟΔΟΙ

Δήλωση ηθικής

Όλα τα πειράματα σε ζώα πραγματοποιήθηκαν σύμφωνα με το Animals Act 1986 και τις οδηγίες Animal Research: Reporting of In Vivo Experiments (ARRIVE), ακολουθώντας το πρωτόκολλο που εγκρίθηκε από τις κατευθυντήριες γραμμές του Υπουργείου Εσωτερικών του ΗΒ (άδεια έργου ΗΒ PPL αρ. P07D80C24).

Διάδοση και ποσοτικοποίηση RV

Για τις μελέτες κυτταρικής σειράς σε ποντίκια και ανθρώπους, ο ορότυπος-Α1 της δευτερεύουσας ομάδας RV (RV-A1) αναπτύχθηκε σε κύτταρα Οχάιο HeLa (Ευρωπαϊκή Συλλογή Κυτταρικών Καλλιεργειών). Τα μολυσμένα κύτταρα συλλέχθηκαν μετά από 24 ώρες και ο ιός συμπυκνώθηκε και καθαρίστηκε και πραγματοποιήθηκε ανάλυση TCID50 (50 τοις εκατό μολυσματική δόση ιστοκαλλιέργειας) για να εκτιμηθεί ο τίτλος του ιού όπως περιγράφηκε προηγουμένως.12 Για τις μελέτες ανθρώπινων πρωτογενών βρογχικών επιθηλιακών κυττάρων (BEC) , το RV-A1 πολλαπλασιάστηκε σε κύτταρο RD-ICAM-1 από ένα εσωτερικό απόθεμα που απομονώθηκε από κλινικά δείγματα και αναλύθηκε η αλληλουχία για επιβεβαίωση της ταυτότητας. Το RV-A1 τιτλοδοτήθηκε με μόλυνση του κυττάρου RD-ICAM-1 με σειριακά αραιωμένο RV-A1, ακολουθούμενο από παρατηρήσεις κυτταροπαθητικών επιδράσεων και ανάλυση TCID50 για την αξιολόγηση του τίτλου του ιού.

Μελέτη ποντικιού

Θηλυκά ποντίκια BALB/c ηλικίας έξι εβδομάδων αγοράστηκαν από τα εργαστήρια Harlan (Derby, UK) και διατηρήθηκαν σε συγκεκριμένες συνθήκες απαλλαγμένες από παθογόνα στο Imperial College του Λονδίνου (Ηνωμένο Βασίλειο). Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε προκαταρκτική αγωγή ενδορινικά με 50 mL οξικού νατρίου, βουτυρικού ή προπιονικού (Sigma-Aldrich, St Louis, Mo) υπό ελαφρά αναισθησία με ισοφθοράνιο. Σε ορισμένα πειράματα, τα ποντίκια στη συνέχεια μολύνθηκαν ενδορινικά με 50 mL RV (5 3 106 TCID50) 24 ώρες αργότερα. Η δόση της θεραπείας με οξικό ήταν 20 mM σύμφωνα με την προηγούμενη μελέτη μας χρησιμοποιώντας την ίδια προσέγγιση.11 Η θεραπεία με οξικό οξύ χορηγούνταν ενδορινικά κάθε 24 ώρες μετά τη μόλυνση.

Ποσοτική PCR σε πραγματικό χρόνο

Ολικό RNA από τον πνεύμονα (100 mg πνευμονικού ιστού) και κυτταρόλυμα εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας το κιτ RNeasy Mini (Qiagen, Hilden, Γερμανία) σύμφωνα με τις οδηγίες του κατασκευαστή. Το cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας τυχαίους εκκινητές εξαμερούς (κιτ OmniscriptRT, Qiagen). Το cDNA πρώτης έλικος χρησιμοποιήθηκε για τον ποσοτικό προσδιορισμό των αντιγράφων IFN-b, IFN-l, Viperin, MuC5AC (ποντικός και άνθρωπος), OAS1, RIG-I (Ddx58), MAVS, MDA-5 (ποντίκι) και RV Αναλύσεις TaqMan με εκκινητές και ανιχνευτές, όπως αναφέρθηκε προηγουμένως.13 Για απόλυτη ποσοτικοποίηση, κάθε γονίδιο κανονικοποιήθηκε στο επίπεδο 18s rRNA και τα ακριβή αντίγραφα του γονιδίου ενδιαφέροντος υπολογίστηκαν χρησιμοποιώντας μια τυπική καμπύλη που δημιουργήθηκε από την ενίσχυση του πλασμιδικού DNA. Εναλλακτικά, χρησιμοποιήθηκε 2-DDCt (αναδίπλωση-αλλαγή) για τον υπολογισμό της γονιδιακής έκφρασης. Οι συνθήκες PCR ακολούθησαν τα πρωτόκολλα TaqMan Universal PCR Master Mix (Thermo Fisher Scientific, Waltham, Mass). Η δοκιμασία γονιδιακής έκφρασης διεξήχθη χρησιμοποιώντας StepOne (Applied Biosystems, Waltham, Mass).

Υγρό βρογχοκυψελιδικής πλύσης

Τα ποντίκια υποβλήθηκαν σε ευθανασία με ενδοπεριτοναϊκή χορήγηση υπερδοσολογίας διαλύματος πεντοβαρβιτόνης και οι τραχεία διασωληνώθηκαν. Οι πνεύμονες πλύθηκαν 3 φορές με στείρο PBS. Το υγρό βρογχοκυψελιδικής πλύσης (BAL) φυγοκεντρήθηκε, το υπερκείμενο συλλέχθηκε για μέτρηση δίκλωνου DNA και τα σφαιρίδια εναιωρήθηκαν για ολική και διαφορική μέτρηση κυττάρων. Για τη διαφορική μέτρηση των κυττάρων, οι αντικειμενοφόρες πλάκες κυτταροσπίνης χρωματίστηκαν με MayGrunwald-Giemsa και η διαδικασία μέτρησης πραγματοποιήθηκε με τυφλό τρόπο από έμπειρο ερευνητή.

Μέτρηση δίκλωνου DNA

Το δίκλωνο DNA μετρήθηκε στο υγρό BAL χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο δίκλωνου DNA Quant-iT PicoGreen (Invitrogen, Carlsbad, Calif) σύμφωνα με το πρωτόκολλο του κατασκευαστή.

Ιστολογική ανάλυση

Μετά την BAL, οι πνεύμονες εγχύθηκαν με PBS μέσω της καρδιάς και φουσκώθηκαν με 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδη και στη συνέχεια ο αριστερός πνεύμονας σταθεροποιήθηκε σε 4 τοις εκατό παραφορμαλδεΰδης για 24 ώρες. Στη συνέχεια, τα τεμάχια ενσωματώθηκαν σε μπλοκ παραφίνης και κόπηκαν σε τμήματα 5-mm, χρωματίστηκαν με αιματοξυλίνη και ηωσίνη. Το φλεγμονώδες διήθημα μετρήθηκε σε μικρόμετρα και πραγματοποιήθηκαν 10 μετρήσεις, ξεκινώντας από το τέλος του βρογχικού ή αγγειακού επιθηλίου έως το τέλος του φλεγμονώδους διηθήματος χρησιμοποιώντας το λογισμικό Olympus CellSens Standard (Olympus Corporation, Τόκιο, Ιαπωνία). Όλες οι μετρήσεις πραγματοποιήθηκαν τυφλά ως προς τις πειραματικές συνθήκες.

Κυτταρομετρία ροής

Τα κύτταρα απομονώθηκαν από τον πνεύμονα με έγχυση με PBS και στη συνέχεια υποβλήθηκαν σε πέψη σε μέσο RPMI 1640 συμπληρωμένο με 1 mg/mL κολλαγενάσης IV (Invitrogen-Gibco, Waltham, Mass). Κύτταρα που απομονώθηκαν από τον πνεύμονα και το BAL επωάστηκαν με Mouse Fc Block (#553141 BD Biosciences, Franklin Lakes, NJ) για 20 λεπτά. Τα κύτταρα πλύθηκαν και χρωματίστηκαν με επιφανειακά αντισώματα αντι-CD45 (1:200, #557235, κλώνος 30-F11, BD Biosciences). Για ενδοκυτταρική χρώση, τα κύτταρα σταθεροποιήθηκαν με cytofix/κυτταρόπλασμα (BD Biosciences) και με αντι-RIG-I (1:50, #35H2L48, ThermoFisher Scientific, Waltham, Mass) και μετά την επώαση, τα κύτταρα επισημάνθηκαν με δευτερεύον αντίσωμα κατσίκας κατά κουνελιού IgG H&L Cy3-συζευγμένο (1:1000, # ab97075, Abcam, Cambridge, Mass). Τα δείγματα ελήφθησαν στο κυτταρόμετρο ροής BD FACS Canto-II (BD Biosciences). Τα δεδομένα αναλύθηκαν σε λογισμικό FlowJo (έκδοση 10, Tree Star, Inc, Ashland, Va).

Μελέτες in vitro σε επιθηλιακές κυτταρικές σειρές

Τα ανθρώπινα BEC (BEAS-2B) και τα ανθρώπινα πνευμονικά επιθηλιακά κύτταρα (A549) αγοράστηκαν από την ATCC (Manassas, Va) και καλλιεργήθηκαν όπως περιγράφηκε προηγουμένως.13 Τα κύτταρα σπάρθηκαν μεμονωμένα σε συγκέντρωση 1.5 3 105 κύτταρα/mL σε 12-πλάκες φρεατίου. Είκοσι τέσσερις ώρες μετά τη σπορά, τα κύτταρα υποβλήθηκαν σε επεξεργασία με 400 mM οξικού νατρίου (Sigma-Aldrich) για άλλες 24 ώρες. Στη συνέχεια, τα κύτταρα μολύνθηκαν με RV-A1 (Πολλαπλότητα μόλυνσης [MOI] 2) για 1 ώρα μετά την οποία ο ιός απομακρύνθηκε, τα κύτταρα πλύθηκαν και προστέθηκαν νέα μέσα συμπληρωμένα με 5 τοις εκατό FBS. Περαιτέρω κατεργασία με οξικό (400 mM) προστέθηκε αμέσως μετά τη μόλυνση και κάθε 24 ώρες μέχρι τη συλλογή των κυττάρων.

Συλλογή πρωτογενών BEC και έγκριση δεοντολογίας

Τα BEC από έναν υγιή μη καπνιστή συλλέχθηκαν από βρογχικά βουρτσίσματα κατά τη διάρκεια της βρογχοσκόπησης, με γραπτή ενημερωμένη συγκατάθεση. Όλα τα πειράματα διεξήχθησαν από την επιτροπή δεοντολογίας της υπηρεσίας υγείας της περιοχής Hunter New England (05/08/10/3.09) και τις εγκρίσεις της Επιτροπής Ασφάλειας του Πανεπιστημίου του Newcastle (H-163-1205).

Επαναπρογραμματισμός υπό όρους BEC και καλλιέργειες διεπαφής αέρα-υγρού

Τα BEC επαναπρογραμματίστηκαν υπό όρους με αναστολέα πρωτεϊνικής κινάσης που σχετίζεται με rho (τελική συγκέντρωση 10mM) και σε συνδυασμό με ακτινοβολημένους ινοβλάστες NIH{-3Τ3 σε μονοστιβαδικές καλλιέργειες όπως περιγράφηκε προηγουμένως.14,15 Τα υπό όρους επαναπρογραμματισμένα μέσα αποτελούνταν από αναλογία 1:2 τροποποιημένου υλικού Dulbecco Eagle (υψηλή γλυκόζη 1 L-γλουταμίνη)/Ham's F12 συμπληρωμένο με 5 τοις εκατό FCS, υδροκορτιζόνη (400 ng/mL), ινσουλίνη (5 mg/mL), ανασυνδυασμένο ανθρώπινο επιθηλιακό αυξητικό παράγοντα (10 ng). /mL), τοξίνη χολέρας (8,4 ng/mL), αδενίνη (23,9 mg/mL) και 0,2 τοις εκατό πενικιλλίνη-στρεπτομυκίνη.16 Επεκταμένα υπό όρους επαναπρογραμματισμένα BEC απογαλακτίστηκαν από τον αναστολέα πρωτεϊνικής κινάσης που σχετίζεται με rho και σπάρθηκαν σε {{24} }πηγαδιών πολυεστερικές μεμβράνες διαπηγαδιών και διαφοροποιήθηκαν στη διεπιφάνεια αέρα-υγρού (ALI) για 25 ημέρες όπως περιγράφηκε προηγουμένως.17 Πειράματα πραγματοποιήθηκαν με n 5 4 βιοτεχνικά αντίγραφα. Η τυπική χρώση Alcian blue, pH 2,5 και περιοδικού οξέος-Schiff διεξήχθη σε τομές ALI πάχους 5-mm για να απεικονιστεί το ψευδοστρωματοποιημένο επιθήλιο (βλ. Εικ. Ε1 στο Online Repository αυτού του άρθρου στη διεύθυνση www.jacionline.org).

Θεραπεία SCFA σε καλλιέργεια BEC

Πριν από τη μόλυνση, οι καλλιέργειες ALI αντιμετωπίστηκαν βασικά με 100, 400 ή 1600 mM οξικού, βουτυρικού , ή προπιονικό για 24 ώρες σε 600 mL τελικό μέσο ALI που αποτελείται από μέσο βρογχικής βάσης επιθηλίου και τροποποιημένο με Dulbecco μέσο Eagle (αναλογία 50:50) που περιέχει υδροκορτιζόνη (0,1 τοις εκατό ) , βόεια ινσουλίνη (0,1 τοις εκατό), επινεφρίνη (0,1 τοις εκατό), τρανσφερίνη (0,1 τοις εκατό), εκχύλισμα βόειας υπόφυσης (0,4 τοις εκατό) και αιθανολαμίνη (80 mM), MgCl2 (0,3 mM), MgSO4 (0,4 mM), BSA (0,5 mg /mL), αμφοτερικίνη Β (250 mg/mL), all-trans ρετινοϊκό οξύ (30 ng/mL), πενικιλλίνη/στρεπτομυκίνη (2 τοις εκατό) και ανασυνδυασμένος ανθρώπινος επιθηλιακός αυξητικός παράγοντας (0,5 ng/mL). Την ημέρα της μόλυνσης, τα βασικά μέσα αντικαταστάθηκαν με νέα τελικά μέσα ALI και θεραπεία SCFA, η οποία αφέθηκε μέχρι την ανάλυση τελικού σημείου.

RV μόλυνση και δειγματοληψία

Οι καλλιέργειες ALI-BEC μολύνθηκαν κορυφαία με RV-A1. Αρχικά, το απόθεμα RV-A1 αραιώθηκε για να ληφθεί ένα MOI 0.1 και προστέθηκε στην κορυφαία επιφάνεια των καλλιεργειών για 2 ώρες σε 50 mL μέσου βάσης βρογχικού επιθηλίου με συμπληρώματα, 1 τοις εκατό ινσουλίνη- τρανσφερίνη-σελήνιο και 0,5 τοις εκατό λινολεϊκό οξύ. Τα μέσα μόλυνσης στη συνέχεια αντικαταστάθηκαν με 500 mL φρέσκου μέσου βάσης βρογχικού επιθηλίου (με συμπληρώματα) για το υπόλοιπο του πειράματος. Δείγματα κορυφαίας πλύσης (100 mL PBS) και βασικών μέσων συλλέχθηκαν σε 8- και 48-ώρα μετά τη μόλυνση και αποθηκεύτηκαν στους 2808 C. Τα κύτταρα αποθηκεύτηκαν σε 350 mL ρυθμιστικού διαλύματος RLT (Qiagen) που περιείχε 1 τοις εκατό 2-μερκαπτοαιθανόλη στους 2808 C για αναλύσεις γονιδιακής έκφρασης με RT-ποσοτική PCR χορηγήθηκε (Σχήμα Ε2, C).

Σε συμφωνία με τις αυξημένες αντιικές ανοσολογικές επιδράσεις, το οξικό άλας έτεινε να μειώνει τον αριθμό αντιγράφων του ιικού RNA (Εικ. E2, D) και μείωσε τα φορτία ζωντανών ιών (Εικ. Ε2, Ε) 48 ώρες μετά τη μόλυνση. Σε κύτταρα BEAS2B, μια σειρά BEC, παρατηρήσαμε ότι η επεξεργασία με οξικό αύξησε την έκφραση του mRNA IFNB1 στις 8 ώρες μετά τη μόλυνση και του mRNA IFNL2 στις 4 και 8 ώρες μετά τη μόλυνση (Σχήμα E2, F). Δεν υπήρξε σημαντική επίδραση στην έκφραση Viperin (Εικόνα E2, F). Σε αντίθεση με τις επιδράσεις στα φορτία του ιού που παρατηρήθηκαν στα κύτταρα Α459, δεν υπήρξε επίδραση του οξικού στο ιικό RNA ή τον ποσοτικό προσδιορισμό TCID50 σε κύτταρα BEAS2B (Εικόνα E2, G και H).

Επίδραση της θεραπείας με SCFA στις αντιικές αποκρίσεις σε καλλιέργειες μολυσμένες με ALI-BEC

Έχοντας παρατηρήσει μια ενισχυτική επίδραση του οξικού σε πνευμονικές επιθηλιακές κυτταρικές σειρές, στη συνέχεια προσπαθήσαμε να αξιολογήσουμε τα αποτελέσματα σε ένα μοντέλο πρωτογενών επιθηλιακών κυττάρων που διαφοροποιήθηκαν στο ALI (ένα πειραματικό σύστημα που ανακεφαλαιώνει πιο πιστά in vivo κύτταρα). Η διαφοροποίηση και η μορφολογία των κυττάρων επιβεβαιώθηκαν με το σχηματισμό κύλικων κυττάρων (χρώση με περιοδικό οξύ-Schiff) (Εικόνα Ε1).

Το οξικό αύξησε σημαντικά την IFNB1 και την IFNl2/3 (IL28) σε μολυσμένα με RV κύτταρα BEC σε σύγκριση με μη μολυσμένα κύτταρα (Εικ. 3, Β και D), αλλά δεν υπήρχε διαφορά σε σύγκριση με κύτταρα μολυσμένα με RV χωρίς θεραπεία. Το οξικό άλας έτεινε να μειώνει το ιικό RNA είτε στις 8 ώρες είτε στις 48 ώρες μετά τη μόλυνση με RV-A1 (Εικ. 3, Α και Β). Δεδομένου ότι το οξικό είχε λιγότερο σαφείς ενισχυτικές επιδράσεις στην επαγωγή RV των αποκρίσεων IFN τύπου Ι σε πρωτογενή διαφοροποιημένα επιθηλιακά κύτταρα, επεκτείναμε τις έρευνές μας για να καθορίσουμε εάν το βουτυρικό ή το προπιονικό είχαν ευδιάκριτα αποτελέσματα. Το βουτυρικό και το προπιονικό αύξησαν επίσης την έκφραση mRNA των γονιδίων IFNb, IFNl2/3 (IL28) και IFNl1 (IL29) σε σύγκριση με τα μη μολυσμένα κύτταρα (Εικόνα 3, F, G, H και L). Η θεραπεία με βουτυρικό αύξησε την έκφραση των IFNB1, IL28 και IL29 σε 48 ώρες μετά τη μόλυνση με RV σε σύγκριση με κύτταρα μολυσμένα με RV χωρίς θεραπεία, αν και αυτή η επίδραση δεν ήταν επαρκής για να έχει αντίκτυπο στο ιικό φορτίο (Εικ. 3, I, J, K, και εγώ). Δεν βρήκαμε κατασταλτική επίδραση στην έκφραση MUC5AC που προκαλείται από RV σε οποιαδήποτε δόση θεραπείας με SCFA (βλ. Εικ. E3, AC, στο Online Repository αυτού του άρθρου στη διεύθυνση www. jacionline.org). Συλλογικά, αυτά τα δεδομένα υποδεικνύουν ότι, σε αντίθεση με τα δεδομένα σε ποντίκια και ανθρώπινες κυτταρικές σειρές, τα SCFAs έχουν πιο περιορισμένες επιδράσεις στην αντιική ανοσία σε διαφοροποιημένα πρωτογενή επιθηλιακά κύτταρα.

Καμία επίδραση των SCFAs στις αποκρίσεις IFN τύπου Ι σε κυψελιδικά μακροφάγα

Για να διερευνήσουμε εάν η αντιική επίδραση του οξικού και/ή άλλων SCFAs οφειλόταν στη διαμόρφωση των κυψελιδικών μακροφάγων (ένα κύριο πρώιμο ανταποκρινόμενο κύτταρο κατά τη διάρκεια ιογενών λοιμώξεων και βασική πηγή της IFN τύπου Ι), αξιολογήσαμε την επίδραση της χορήγησης SCFA σε ex vivo αντιιικές αποκρίσεις σε μακροφάγα που διεγείρονται με RVA1. Διαπιστώσαμε ότι η χορήγηση SCFA δεν είχε σημαντική επίδραση στην επαγωγή Ifnb1, Viperin ή OAS1 από το RV, υποδεικνύοντας ότι οι ανοσοενισχυτικές επιδράσεις των SCFAs δεν εμφανίζονται μέσω επιδράσεων σε κυψελιδικά μακροφάγα (βλ. Εικ. E4, AC, σε αυτό το άρθρο Online Αποθετήριο στο www.jacionline.org).

Οι αναπνευστικοί αγωγοί SCFA αυξημένοι υποδοχείς IFN-b και ανίχνευσης ιών πριν από τη μόλυνση από RV

Για να αποκτήσουμε πρόσθετη μηχανιστική εικόνα για τα αντιιικά μονοπάτια που εμπλέκονται στην ενίσχυση της IFN τύπου Ι από τα SCFA, διερευνήσαμε στη συνέχεια τις επιδράσεις αυτών των ενώσεων στα γονίδια που ανιχνεύουν την οδό κατά των ιών. Χορηγήσαμε πάλι ενδορινικά τα 3 SCFAs (οξικό, βουτυρικό και προπιονικό) σε συγκεντρώσεις 20 mM, για 24 ώρες (Σχήμα 4, Α). Δεν βρήκαμε καμία επίδραση οποιουδήποτε από τα SCFA στην έκφραση του κυτοσολικού ιικού RNA αισθητήρα MDA5 ή του μορίου προσαρμογέα MAVS του (Εικ. 4, Β και Γ). Αντίθετα, η χορήγηση βουτυρικού (αλλά όχι άλλων SCFAs) ρύθμισε προς τα πάνω την έκφραση mRNA του RIGI (Σχήμα 4, D). Η επαυξητική επίδραση του βουτυρικού στην έκφραση RIG-I βρέθηκε να είναι ειδικά εντός των επιθηλιακών/στρωματικών κυττάρων του πνεύμονα (CD452), χωρίς να παρατηρείται καμία επίδραση στα αιμοποιητικά ανοσοκύτταρα (CD451) (Σχήμα 4, ΕΙ). Συλλογικά, αυτά τα δεδομένα έδειξαν ότι διαφορετικά SCFAs ενδέχεται να δρουν μέσω συγκεκριμένων οδών ανίχνευσης αντιιών για τη ρύθμιση της έμφυτης ανοσίας.

ΣΥΖΗΤΗΣΗ

Αυτή η μελέτη δίνει νέα εικόνα για το πιθανό όφελος από τη χορήγηση μικροβιακών μεταβολιτών απευθείας στους αεραγωγούς για την ενίσχυση της έμφυτης πνευμονικής ανοσίας. Οι διαιτητικές ίνες και τα SCFA που προέρχονται από μικροβιακή χλωρίδα του εντέρου έχουν από καιρό συσχετιστεί με ευεργετικές επιδράσεις στην υγεία των πνευμόνων. Μια τυχαιοποιημένη ελεγχόμενη με εικονικό φάρμακο δοκιμή έδειξε ότι η χρήση πρεβιοτικών (ινών) σε πρόωρα μωρά απέτρεψε τις λοιμώξεις από RV κατά το πρώτο έτος της ζωής. Μελέτες έχουν επίσης βρει ότι τα SCFAs μπορούν να ρυθμίσουν την υγιή μικροχλωρίδα του εντέρου.21 Η μελέτη μας υπογραμμίζει ότι η χορήγηση SCFA από την αναπνευστική οδό μπορεί επίσης να έχει άμεσα τοπικά ευεργετικά αποτελέσματα στις αποκρίσεις του ξενιστή. Έχουμε εντοπίσει έναν ξεχωριστό μηχανισμό από τις διατροφικές επιδράσεις στη μικροχλωρίδα που περιλαμβάνει την άμεση πνευμονική διέγερση της έμφυτης αντιϊκής ανοσίας από SCFAs.

Τα δεδομένα μας δείχνουν ότι η χορήγηση του οξικού SCFA αυξάνει τη βασική έκφραση των αντιικών ανοσομεσολαβητών σε σταθερή κατάσταση. Αυτό ταιριάζει εννοιολογικά με τον ρόλο του οξικού άλατος στην εκκίνηση των πνευμόνων για μια πιο ισχυρή πρώιμη απελευθέρωση IFNs. Αυτό υποστηρίχθηκε από τα ευρήματά μας ότι η χορήγηση οξικού ενίσχυσε επίσης την επαγωγή IFN και ISG σε απόκριση στη μόλυνση από RV σε ποντίκια. Αυτό συσχετίστηκε με μειωμένα φορτία ιού και μεταγενέστερη καταστολή των προφλεγμονωδών αποκρίσεων και της παραγωγής βλέννας. Όλες αυτές οι επιδράσεις θα θεωρούνταν ότι είναι ευεργετικές στο πλαίσιο μιας οξείας λοίμωξης από τον ιό. Τα δεδομένα μας ταιριάζουν με ένα σύνολο βιβλιογραφίας που δείχνει ότι το οξικό έχει εμπλακεί στην παροχή ευρέως πλεονεκτημάτων για την υγεία, όπως η βελτίωση της καρδιακής λειτουργίας, η ενίσχυση της δημιουργίας ερυθρών αιμοσφαιρίων και ο σχηματισμός ανοσολογικής μνήμης.22 Επιπλέον, το οξικό οξύ συνδέεται με τη ρύθμιση διαφορετικών λειτουργίες της ανοσολογικής απόκρισης23-25 και τον έλεγχο των αναπνευστικών ασθενειών.

Μελετήσαμε επίσης την επίδραση της χορήγησης οξικού στη μόλυνση από RV του επιθηλίου επειδή είναι η κύρια θέση αρχικής αντιγραφής του ιού. Βρήκαμε παρόμοιο αντιιικό ενισχυτικό αποτέλεσμα του οξικού σε ανθρώπινες πνευμονικές κυτταρικές σειρές, με πιο ισχυρά αποτελέσματα που παρατηρήθηκαν στα κύτταρα A549 από ότι στα BEAS-2Β κύτταρα (τα οποία είναι γνωστό ότι εκφράζουν υψηλότερα βασικά επίπεδα IFN και ISG).27 ,28 Αυτό θα μπορούσε να εξηγήσει εν μέρει γιατί η θεραπεία με οξικό είχε μικρότερες επιδράσεις στα BEAS-2Β κύτταρα. Αντίθετα, παρατηρήσαμε ότι σε ανθρώπινα πρωτογενή διαφοροποιημένα BEC (ALI-BECs), δεν υπήρχε σαφής επίδραση του οξικού στις αποκρίσεις IFN τύπου Ι στο RV. Επιπλέον, αξιολογήσαμε επίσης την ικανότητα του οξικού και άλλων SCFA να ρυθμίζουν τις αποκρίσεις IFN τύπου Ι σε κυψελιδικούς μακροφάγους που καλλιεργήθηκαν ex vivo και παρομοίως δεν βρήκαμε καμία επίδραση. Αυτή η ασυμφωνία μεταξύ in vivo και in vitro ευρημάτων μπορεί να υποδηλώνει ότι πολλαπλοί τύποι κυττάρων και επικοινωνίες κυττάρου-κυττάρου μπορεί να είναι υπεύθυνες για τον καθαρό φαινότυπο που παρατηρείται in vivo, με λιγότερο ισχυρό αποτέλεσμα που παρατηρείται όταν απομονωμένα κύτταρα υποβάλλονται σε επεξεργασία με SCFAs.

Αν και ο πρωταρχικός στόχος της μελέτης μας ήταν η αξιολόγηση των επιδράσεων του SCFA στην εγγενή αντιική ανοσία, είναι κατανοητό ότι θα μπορούσαν να προκύψουν μεταγενέστερες επιδράσεις στις προσαρμοστικές ανοσολογικές αποκρίσεις και μελλοντικές μελέτες μπορεί να επικεντρωθούν σε πιθανές επιδράσεις στους πληθυσμούς και την παραγωγή Τ- και Β-λεμφοκυττάρων εξουδετερωτικών αντισωμάτων.

Θα πρέπει επίσης να σημειωθεί ότι το μοντέλο ποντικιού που χρησιμοποιήσαμε είναι ένα μοντέλο όπου λαμβάνει χώρα σχετικά περιορισμένη (;24-36 ώρες) αναπαραγωγή ιού, αν και όλα τα τελικά σημεία που μετρώνται εξαρτώνται από την αναπαραγωγή.12,29 Περαιτέρω μελέτες, χρησιμοποιώντας στελέχη ιών προσαρμοσμένων σε ποντίκια όπου εμφανίζεται πιο παρατεταμένος ιικός πολλαπλασιασμός, μπορεί να παρουσιάσει πιο βαθιά και παρατεταμένα αποτελέσματα. Επιπλέον, τα πειράματά μας διεξήχθησαν αποκλειστικά σε θηλυκά ποντίκια και περαιτέρω μελέτες θα πρέπει να επιβεβαιώσουν εάν παρόμοια αποτελέσματα εμφανίζονται και στα αρσενικά.

Αν και το οξικό είχε περιορισμένες επιδράσεις στα ALI-BEC, παρατηρήσαμε ότι η χορήγηση βουτυρικού θα μπορούσε να αυξήσει την επαγωγή RV των αποκρίσεων IFN τύπου Ι. Αυτά τα δεδομένα έρχονται σε αντίθεση με τη μελέτη των Chemudupati et al,30 η οποία κατέδειξε κατασταλτική επίδραση του βουτυρικού στις αποκρίσεις IFN τύπου Ι. Ωστόσο, αυτή η μελέτη χρησιμοποίησε πολύ υψηλότερες συγκεντρώσεις βουτυρικού και επικεντρώθηκε επίσης σε διαφορετικούς ιούς του αναπνευστικού.

Η παραγωγή βλέννας στους πνεύμονες είναι χαρακτηριστικό της λοίμωξης από RV, η οποία οδηγεί σε αυξημένη κλινική βαρύτητα και επιδείνωση του άσθματος και της ΧΑΠ,31,32 ειδικά μέσω της ενίσχυσης της φλεγμονής των αεραγωγών με MUC5AC. 6 μετά τη μόλυνση. Συνεπώς, τα SCFAs έχει αποδειχθεί ότι εξασθενούν την παραγωγή βλέννας στον πνεύμονα κατά τη διάρκεια της λοίμωξης από γρίπη34 και της αλλεργικής φλεγμονής των αεραγωγών.34,35 Ωστόσο, στα κύτταρα ALI-BEC, το οξικό δεν ρυθμίζει την έκφραση του γονιδίου Muc5AC, αν και θα πρέπει να σημειωθεί ότι μεταγενέστερα χρονικά σημεία ήταν δεν εξετάζεται. Η παρατήρησή μας για μειωμένη έκφραση βλεννίνης σε ποντίκια που υποβλήθηκαν σε αγωγή με οξικό άλας και μολύνθηκαν με τον ιό είναι σύμφωνη με τα προηγούμενα ευρήματά μας ότι η IFN τύπου Ι ρυθμίζει αρνητικά την έκφραση Muc5ac βλεννίνης των κυρίων αεραγωγών κατά τη διάρκεια της μόλυνσης από τον ιό.14 Οι μοριακοί μηχανισμοί μέσω των οποίων συμβαίνει αυτό είναι ασαφείς , αν και προηγούμενα στοιχεία δείχνουν ότι η φλεγμονή τύπου 2 που προκαλείται από την IL{16}} μπορεί να είναι σημαντική για την επαγωγή του MUC5AC.36,37 Περαιτέρω μελέτες θα πρέπει να επιδιώξουν να κατανοήσουν πληρέστερα πώς το οξικό μπορεί να επηρεάσει την παραγωγή βλέννας των αεραγωγών.

Για να μελετήσουμε τους μοριακούς μηχανισμούς μέσω των οποίων τα SCFAs επάγουν IFN, μετρήσαμε επιπλέον την έκφραση των γονιδίων που ανιχνεύουν την οδό κατά των ιών. Παρατηρήσαμε ότι το βουτυρικό, και σε μικρότερο βαθμό το οξικό, μπορούν να προκαλέσουν έκφραση RIG-I σε επιθηλιακά κύτταρα πνεύμονα από αφελείς ποντικούς. Τα δεδομένα μας υποδηλώνουν ότι αυτά τα SCFA αυξάνουν την απόκριση ανίχνευσης του ιού, προετοιμάζοντας τους πνεύμονες για μια επαυξημένη έμφυτη απόκριση σε μια μόλυνση από ιό.

Μειωμένη ex vivo παραγωγή IFN τύπου Ι σε λοίμωξη από RV έχει δειχθεί στα επιθηλιακά κύτταρα των αεραγωγών τόσο στο άσθμα όσο και στη ΧΑΠ.38,39 Υποτίθεται ότι αυτό το ελάττωμα αυξάνει την ευαισθησία σε παροξύνσεις που προκαλούνται από τον ιό σε αυτά τα άτομα. Οι μηχανισμοί που προκαλούν αυτά τα ελαττώματα είναι άγνωστοι. Απαιτείται περαιτέρω εργασία με τη χρήση ζωικών μοντέλων ή συστημάτων ασθενούς κυτταροκαλλιέργειας για να προσδιοριστεί εάν η μικροβιακή δυσβίωση που παρατηρείται στο άσθμα και τη ΧΑΠ οδηγεί σε σχετική ανεπάρκεια οξικού ή άλλων SCFAs, η οποία θα μπορούσε να διορθωθεί μέσω της χορήγησης για την αποκατάσταση της μειωμένης αντιϊκής ανοσίας.

Συνοπτικά, η χρήση των SCFAs ως θεραπεία κατά της λοίμωξης από RV σχετίζεται με την αύξηση της παραγωγής IFN τύπου Ι και τύπου III, κεντρικών συστατικών της πνευμονικής αντιϊκής ανοσολογικής απόκρισης. Αυτή η μελέτη υπογραμμίζει ότι η χορήγηση μικροβιακών μεταβολιτών στους αεραγωγούς όπως τα SCFAs μπορεί να έχει ευεργετικά αποτελέσματα στην αντιϊκή ανοσία και θα μπορούσε ενδεχομένως να βελτιώσει τη σοβαρότητα των αναπνευστικών ιογενών ασθενειών.

ΒΙΒΛΙΟΓΡΑΦΙΚΕΣ ΑΝΑΦΟΡΕΣ

1.Trompette Α, Gollwitzer ES, Yadava Κ, Sichelstiel AK, Sprenger Ν, Ngom-Bru C, et al. Ο μεταβολισμός των διαιτητικών ινών της μικροχλωρίδας του εντέρου επηρεάζει την αλλεργική νόσο των αεραγωγών και την αιμοποίηση. Nat Med 2014;20:159-66.

2. Thorburn ΑΝ, McKenzie CI, Shen S, Stanley D, Macia L, Mason LJ, et al. Απόδειξη ότι το άσθμα είναι μια ασθένεια αναπτυξιακής προέλευσης που επηρεάζεται από τη διατροφή της μητέρας και τους βακτηριακούς μεταβολίτες. Nat Commun 2015; 6:7320.

3. Rivera-Chavez F, Zhang LF, Faber F, Lopez CA, Byndloss MX, Olsan EE, et al. Η εξάντληση των Clostridia που παράγουν βουτυρικά από τη μικροχλωρίδα του εντέρου οδηγεί σε αερόβια διαστολή της σαλμονέλας στον αυλό. Cell Host Microbe 2016;19:443-54.

4. Fachi JL, Secca C, Rodrigues PB, Mato FCP, Di Luccia B, Felipe JS, et al. Το οξικό άλας συντονίζει τις αποκρίσεις ουδετερόφιλων και ILC3 έναντι του C. difficile μέσω του FFAR2. J Exp Med 2020;217:jem.20190489.

5. Antunes KH, Fachi JL, de Paula R, da Silva EF, Pral LP, Dos Santos AA, et al. Το οξικό άλας που προέρχεται από μικρόβια προστατεύει από τη μόλυνση από αναπνευστικό συγκυτιακό ιό μέσω μιας απόκρισης ιντερφερόνης GPR43-τύπου 1. Nat Commun 2019; 10:3273.

6. Correa-Oliveira R, Fachi JL, Vieira A, Sato FT, Vinolo MA. Ρύθμιση της λειτουργίας των ανοσοκυττάρων από λιπαρά οξέα βραχείας αλυσίδας. Clin Transl Immunol 2016;5:e73.

7. Koh A, De Vadder F, Kovatcheva-Datchary P, Backhed F. Από τις διαιτητικές ίνες στη φυσιολογία του ξενιστή: λιπαρά οξέα βραχείας αλυσίδας ως βασικοί βακτηριακοί μεταβολίτες. Cell 2016;165: 1332-45.

8. Sulaiman I, Wu BG, Li Y, Tsay JC, Sauthoff Μ, Scott AS, et αϊ. Λειτουργικό γονιδιωματικό προφίλ κατώτερων αεραγωγών του μικροβιώματος για τη σύλληψη του ενεργού μικροβιακού μεταβολισμού. Eur Respir J 2021;58:2003434.

9. Glanville N, Johnston SL. Προκλήσεις στην ανάπτυξη ενός διασταυρούμενου οροτυπικού εμβολίου ρινοϊού. Curr Opin Virol 2015;11:83-8.

10. Spacova I, De Boeck I, Bron PA, Delputte P, Lebeer S. Τοπικά μικροβιακά θεραπευτικά κατά των αναπνευστικών ιογενών λοιμώξεων. Trends Mol Med 2021;27:538-53.

11. Antunes KH, Stein RT, Franceschina C, da Silva EF, de Freitas DN, Silveira J, et αϊ. Το οξικό λιπαρό οξύ βραχείας αλυσίδας πυροδοτεί μια αντιική απόκριση που προκαλείται από το RIG-I σε κύτταρα από βρέφη με βρογχιολίτιδα του αναπνευστικού συγκυτιακού ιού. EBioMedicine 2022;77: 103891.

12. Bartlett NW, Walton RP, Edwards MR, Aniscenko J, Caramori G, Zhu J, et αϊ. Μοντέλα ποντικών ασθένειας που προκαλείται από ρινοϊό και επιδείνωση της αλλεργικής φλεγμονής των αεραγωγών. Nat Med 2008;14:199-204.

13. Singanayagam Α, Glanville Ν, Girkin JL, Ching ΥΜ, Marcellini Α, Porter JD, et αϊ. Η καταστολή της αντιϊκής ανοσίας με κορτικοστεροειδή αυξάνει τα βακτηριακά φορτία και την παραγωγή βλέννας σε παροξύνσεις ΧΑΠ. Nat Commun 2018; 9:2229.

14. Gentzsch Μ, Boyles SE, Cheluvaraju C, Chaudhry IG, Quinney NL, Cho C, et αϊ. Φαρμακολογική διάσωση υπό όρους επαναπρογραμματισμένων βρογχικών επιθηλιακών κυττάρων κυστικής ίνωσης. Am J Respir Cell Mol Biol 2017;56:568-74.

15. Liu X, Ory V, Chapman S, Yuan Η, Albanese C, Kallakury Β, et αϊ. Ο αναστολέας ROCK και τα κύτταρα τροφοδοσίας επάγουν τον υπό όρους επαναπρογραμματισμό των επιθηλιακών κυττάρων. Am J Pathol 2012;180:599-607.

For more information:1950477648nn@gmail.com