Περίληψη

Σκοπός:
Για τη διερεύνηση των επιδράσεων της ακτεοσίδης στη δραστηριότητα των οστεοβλαστών και των οστεοκλαστών σε ποντίκια με ωοθηκεκτομή (OVX).

Μέθοδοι:
Ένα μοντέλο ποντικού μετεμμηνοπαυσιακής οστεοπόρωσης καθιερώθηκε με ωοθηκεκτομή (OVX). Πενήντα ποντίκια C57BL/6 χωρίστηκαν τυχαία σε πέντε ομάδες: ψευδοχειρουργημένη ομάδα, ομάδα μοντέλου, ομάδα οιστρογόνων, ομάδα ακτεοσίδης χαμηλής δόσης και ομάδα ακτεοσίδης υψηλής δόσης, με 10 ποντίκια σε κάθε ομάδα.

Το σωματικό βάρος καταγράφηκε. Η ιστομορφομετρική ανάλυση των οστών πραγματοποιήθηκε με τη χρήση μικρο-υπολογιστικής τομογραφίας (micro-CT). Τα επίπεδα οιστραδιόλης (Ε2), CTX-1, PINP και ALP στον ορό μετρήθηκαν χρησιμοποιώντας τα αντίστοιχα κιτ ανάλυσης. Το βάρος της μήτρας καταγράφηκε. Η χρώση TRAP χρησιμοποιήθηκε για την παρατήρηση του αριθμού των οστεοκλαστών. Χρησιμοποιήθηκε ανοσοϊστοχημεία για την ανίχνευση της έκφρασης της πρωτεΐνης Runx2. Ποσοτική RT-PCR σε πραγματικό χρόνο (qRT-PCR) και ανάλυση Western blot χρησιμοποιήθηκαν για την αξιολόγηση της έκφρασης δεικτών που σχετίζονται με τον σχηματισμό οστού και την οστική απορρόφηση.

Αποτελέσματα:
Σε σύγκριση με την ομάδα που χειρουργήθηκε ψευδώς, τα ποντίκια στην ομάδα μοντέλου εμφάνισαν σημαντικά αυξημένο σωματικό βάρος, σημαντικά μειωμένο βάρος της μήτρας και τα επίπεδα E2, PINP και ALP ορού και σημαντικά αυξημένα επίπεδα CTX-1 ορού. Οι παράμετροι των οστών που περιλαμβάνουν BMD, BV/TV, Tb.N, Tb.Th, PINP, ALP, Runx2, OCN και Col1 μειώθηκαν σημαντικά, ενώ το Tb.Sp αυξήθηκε σημαντικά. Στον μηριαίο ιστό, η έκφραση mRNA ALP, OCN και Col1 μειώθηκε σημαντικά, ενώ η έκφραση mRNA NFATc1 και c-fos, καθώς και η έκφραση πρωτεΐνης Runx2, p-IκB και p-Akt, ήταν σημαντικά αυξημένη (Ρ<0.05P < 0.05P<0.05). The number of osteoclasts was also increased.

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, όλες οι ομάδες θεραπείας εμφάνισαν σημαντικά μειωμένο σωματικό βάρος, σημαντικά αυξημένα επίπεδα PINP και ALP στον ορό και σημαντικά μειωμένα επίπεδα CTX-1 ορού. Τα BMD, BV/TV, Tb.N, Tb.Th, PINP, ALP, Runx2, OCN και Col1 αυξήθηκαν σημαντικά, ενώ το Tb.Sp μειώθηκε σημαντικά. Στον μηριαίο ιστό, η έκφραση mRNA ALP, OCN και Col1 ήταν σημαντικά αυξημένη, ενώ η έκφραση mRNA NFATc1 και c-fos, καθώς και η έκφραση πρωτεΐνης Runx2, p-IκB και p-Akt, μειώθηκαν σημαντικά (Ρ.<0.05P < 0.05P<0.05). The number of osteoclasts was reduced.

Σύναψη:
Το Acteoside ασκεί διπλή ρυθμιστική επίδραση στην αναδόμηση των οστών σε ποντικούς OVX. Μπορεί να βελτιώσει την οστική απώλεια που προκαλείται από το OVX αναστέλλοντας την οστική απορρόφηση που προκαλείται από οστεοκλάστες μέσω της καταστολής της οδού NF-κB/Akt/NFATc1/c-fos, ενώ προάγει τον σχηματισμό οστού που καθοδηγείται από οστεοβλάστες μέσω της ενεργοποίησης του άξονα Runx2/OCN/Col1.

Λέξεις-κλειδιά:
Ακτεοσίδη; μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση; οστεοβλάστες? οστεοκλάστες

Τι είναι η οστεοπόρωση;

Η οστεοπόρωση (OP) είναι μια κοινή και συχνά σιωπηλή σκελετική νόσος που χαρακτηρίζεται από μειωμένη οστική πυκνότητα, επιδείνωση της μικροδομής των οστών, αυξημένη ευθραυστότητα των οστών και υψηλότερο κίνδυνο καταγμάτων. Σε παγκόσμιο επίπεδο, περίπου το 18,3% του πληθυσμού επηρεάζεται, με τις μετεμμηνοπαυσιακές γυναίκες να είναι ιδιαίτερα ευάλωτες. Αυτή η κατάσταση είναι γνωστή ως μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση (PMOP) [1].

Τα οιστρογόνα διαδραματίζουν βασικό ρυθμιστικό ρόλο στην αναδιαμόρφωση των οστών μέσω πολλαπλών μηχανισμών. Κατά την αναδιαμόρφωση των οστών, οι οστεοκλάστες και οι οστεοβλάστες διατηρούν μια δυναμική ισορροπία μεταξύ της οστικής απορρόφησης και του σχηματισμού οστών. Όταν η δραστηριότητα των οστεοβλαστών μειώνεται και/ή η δραστηριότητα των οστεοκλαστών γίνεται υπερβολική, αυτή η ισορροπία διαταράσσεται, οδηγώντας σε σοβαρή απώλεια οστικής θεμέλιας ουσίας [2].

Επομένως, η ρύθμιση της λειτουργίας και του σχηματισμού οστεοβλαστών και οστεοκλαστών μπορεί να είναι μια αποτελεσματική στρατηγική για τη θεραπεία της οστεοπόρωσης που σχετίζεται με ανεπάρκεια οιστρογόνων.

Γιατί να κοιτάξετε τις φυτικές ενώσεις για την οστεοπόρωση;

Τα τρέχοντα κύρια φάρμακα για την οστεοπόρωση περιλαμβάνουν διφωσφονικά, τεριπαρατίδη, ραλοξιφαίνη και εκλεκτικούς ρυθμιστές υποδοχέα οιστρογόνων. Αυτά τα φάρμακα μπορεί να είναι αποτελεσματικά, αλλά μπορεί επίσης να προκαλέσουν ανεπιθύμητες ενέργειες όπως γαστρεντερική δυσφορία και, σε σπάνιες περιπτώσεις, οστεονέκρωση της γνάθου. Αυτές οι ανησυχίες μπορούν να περιορίσουν τη μακροχρόνια χρήση.

Τα τελευταία χρόνια, αυξανόμενη προσοχή έχει δοθεί στην παραδοσιακή βοτανοθεραπεία για την υποστήριξη της υγείας των οστών, ειδικά στην μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση.

Η ρίζα Rehmannia, ένα παραδοσιακό κινέζικο βότανο, είναι γνωστό για τη θρέψη των νεφρών και την προώθηση της κυκλοφορίας του αίματος. Χρησιμοποιείται συχνά σε φυτικές συνθέσεις για την οστεοπόρωση [3]. Αρκετές κλινικές μελέτες έχουν αναφέρει ότι οι κινεζικές φυτικές φόρμουλες που περιέχουν Rehmannia μπορεί να βοηθήσουν στη βελτίωση της οστικής πυκνότητας, στην ανακούφιση του πόνου και στη βελτίωση των κλινικών συμπτωμάτων σε ασθενείς με οστεοπόρωση [4].

Το Acteoside είναι ένα υδατοδιαλυτό φαινυλαιθανοειδές γλυκοσίδιο που βρίσκεται στη Rehmannia, στο Cistanche, στον σπόρο του Plantago και σε άλλα φαρμακευτικά φυτά. Έχει αναφερθεί ότι διαθέτει αντιοξειδωτικές, αντιφλεγμονώδεις, αντιδιαβητικές και προαγωγικές δραστηριότητες του σχηματισμού οστών [5].

Μια μελέτη που βασίζεται σε συστηματική ανασκόπηση και εξόρυξη δεδομένων πολλαπλών βάσεων δεδομένων πρότεινε ότι η ακτεοσίδη μπορεί να είναι ένα από τα βασικά ενεργά συστατικά σε κινεζικές φυτικές συνθέσεις για την μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση [6]. Μελέτες φαρμακολογίας δικτύου έχουν επίσης δείξει ότι η ακτεοσίδη μπορεί να είναι ένα βασικό ενεργό συστατικό σε φυτικές συνθέσεις όπως η κάψουλα Qigu και τα χάπια Zuogui/Yougui για τη θεραπεία της μετεμμηνοπαυσιακής οστεοπόρωσης [7,8].

Αυτά τα ευρήματα υποδηλώνουν ότι η ακτεοσίδη μπορεί να είναι μια πολλά υποσχόμενη φυσική ένωση για την υγεία των οστών. Ωστόσο, ο ακριβής μηχανισμός δράσης του δεν έχει ακόμη διευκρινιστεί πλήρως.

Αυτή η μελέτη σχεδιάστηκε για να διερευνήσει τις επιδράσεις της ακτεοσίδης στη δραστηριότητα των οστεοβλαστών και των οστεοκλαστών σε ένα μοντέλο ποντικού με ωοθηκεκτομή, με στόχο να παρέχει μια επιστημονική βάση για περαιτέρω ανάπτυξη της ακτεοσίδης σε έρευνα που σχετίζεται με την οστεοπόρωση.

 

1. Υλικά και Όργανα

1.1 Πειραματόζωα

Πενήντα θηλυκά ποντίκια C57BL/6 6 εβδομάδων βαθμού SPF αγοράστηκαν από το Hebei Experimental Animal Center, αριθμός άδειας SCXK (Hebei) 2022-001. Τα ποντίκια ζύγιζαν 20-23 g.

Όλα τα ποντίκια διατηρήθηκαν σε κύκλο φωτός/σκότους 12 ωρών, με ελεγχόμενη θερμοκρασία δωματίου στους 22±3∘C22 \\pm 3^\\circ C22±3∘C, υγρασία 55±5%55 \\pm 5\\%55±5%, και επαρκή τροφή και νερό. Μετά από μια εβδομάδα προσαρμοστικής σίτισης, το πείραμα διεξήχθη.

1.2 Φάρμακα και Αντιδραστήρια

Το Acteoside, με καθαρότητα 98% και αριθμό παρτίδας CFN97048, αγοράστηκε από το Wuhan ChemFaces.

Τα δισκία βαλερικής οιστραδιόλης, προδιαγραφής 1 mg χ 21 δισκία, αγοράστηκαν από την Bayer Healthcare Co., Ltd., Guangzhou.

Κιτ ανάλυσης οιστραδιόλης ορού ποντικού (E2), αλκαλικής φωσφατάσης (ALP), C-τερματικού τελοπεπτιδίου διασυνδεδεμένου κολλαγόνου τύπου Ι (CTX-1) και Ν-τερματικού προπεπτιδίου προκολλαγόνου τύπου Ι (PINP) αγοράστηκαν από την Beyotime Biotechnology, Shanghai.

Το ρυθμιστικό διάλυμα λύσης RIPA ελήφθη από τη Sigma, Η.Π.Α. Το κιτ δοκιμασίας πρωτεΐνης Bio-Rad DC ελήφθη από την Bio-Rad Laboratories, ΗΠΑ. Τα αντισώματα αντι-φωσφο-Ακτ, αντι-Ακτ, αντι-φωσφο-ΙκΒ και αντι-ΙκΒ αγοράστηκαν από την Cell Signaling Technology, ΗΠΑ. Το αντίσωμα μεταγραφικού παράγοντα 2 (Runx2) που σχετίζεται με το Anti-Runt αγοράστηκε από την Santa Cruz Biotechnology, ΗΠΑ. Το κιτ χρώσης TRAP αγοράστηκε από τη Sigma, Η.Π.Α. Το αντιδραστήριο TRIZol και το κιτ σύνθεσης cDNA First Strand RevertAid αγοράστηκαν από την Thermo Fisher Scientific, Η.Π.Α.

1.3 Κύρια όργανα

Τα κύρια όργανα που χρησιμοποιήθηκαν ήταν:

SKYSCAN 1276 σαρωτής μικροϋπολογιστικής τομογραφίας, Bruker Technology, Πεκίνο

Αναγνώστης μικροπλακών SpectraMax M, Molecular Devices, Σαγκάη

FA2004N ηλεκτρονική αναλυτική ισορροπία, Sailun Instruments, Πεκίνο

WMP-6105 οπτικό μικροσκόπιο, Wumo Optical Instruments, Σαγκάη

VeritiPro σε πραγματικό χρόνο ποσοτικό σύστημα PCR και συσκευή ηλεκτροφόρησης PowerEase, Thermo Fisher Scientific, Σαγκάη

 

2. Μέθοδοι

2.1 Ίδρυση και Ομαδοποίηση Μοντέλου

Τα ποντίκια C57BL/6 χωρίστηκαν τυχαία σε πέντε ομάδες:

Ομάδα εικονικής λειτουργίας

Ομάδα μοντέλων

Ομάδα οιστρογόνων, 1 mg/kg1 \\text{ mg/kg}1 mg/kg

Ομάδα ακτεοσίδης χαμηλής δόσης, 50 mg/kg50 \\text{ mg/kg}50 mg/kg

Ομάδα ακτεοσίδης υψηλής δόσης, 150 mg/kg150 \\text{ mg/kg}150 mg/kg

Κάθε ομάδα περιείχε 10 ποντίκια.

Όλα τα ζώα αναισθητοποιήθηκαν με πεντοβαρβιτάλη νατρίου 2%. Έγινε μια μικρή τομή για να εκτεθούν οι ωοθήκες. Οι ωοθήκες εντοπίστηκαν απαλά και αφαιρέθηκαν για να καθιερωθεί το μοντέλο OVX. Στην ομάδα που χειρουργήθηκε ψευδώς, αφαιρέθηκε μόνο ο λιπώδης ιστός κοντά στις ωοθήκες.

Μετά την επέμβαση, όλα τα ποντίκια έλαβαν ενδομυϊκή πενικιλίνη σε 50.000 U/ημέρα για 3 διαδοχικές ημέρες.

Μετά την επέμβαση:

Η ομάδα οιστρογόνου έλαβε βαλερική οιστραδιόλη σε 1 mg/kg1 \\text{ mg/kg}1 mg/kg με καθετήρα μία φορά την ημέρα.

Οι ομάδες χαμηλής και υψηλής δόσης ακτεοσίδης έλαβαν ακτεοσίδη με καθετήρα μία φορά την ημέρα.

Οι ομάδες που χειρουργήθηκαν ψευδώς και το μοντέλο έλαβαν καθαρισμένο νερό στα 10 mg/kg10 \\text{ mg/kg}10 mg/kg με καθετήρα.

Τα ποντίκια θυσιάστηκαν 4 εβδομάδες μετά την επέμβαση. Συλλέχθηκαν δείγματα μηριαίου ιστού και αίματος. Τα μηριαία οστά στερεώθηκαν σε 4% παραφορμαλδεΰδη για 48 ώρες και αξιολογήθηκαν χρησιμοποιώντας μικρο-CT.

2.2 Ανίχνευση Micro-CT

Το αριστερό μηριαίο οστό κάθε ποντικιού σαρώθηκε χρησιμοποιώντας μικρο-CT υψηλής ανάλυσης. Οι παράμετροι σάρωσης ήταν:

Τάση: 50 kV

Ρεύμα: 55 μA

Ισότροπη ανάλυση: 6 μm

Πραγματοποιήθηκε σάρωση μηριαίου σε απόσταση 2 mm κοντά στην πλάκα ανάπτυξης, με 720 τομές να σαρώνονται κάθε φορά.

Τα δεδομένα Micro-CT αναλύθηκαν χρησιμοποιώντας το λογισμικό INFINITT-Xelis. Οι αξιολογούμενες δομικές παράμετροι περιελάμβαναν:

Οστική πυκνότητα (BMD)

Όγκος οστού/συνολικός όγκος (BV/TV)

Πάχος δοκιδωτής (Tb.Th)

Σδοκιδωτός διαχωρισμός (Tb.Sp)

Σωληνοειδής αριθμός (Tb.N)

2.3 Βιοχημικοί δείκτες αίματος

Δείγματα αίματος συλλέχθηκαν και φυγοκεντρήθηκαν με 1.300 r/min για 15 λεπτά στους 4∘C4^\\circ C4∘C. Τα κιτ ELISA χρησιμοποιήθηκαν για τη μέτρηση των επιπέδων στον ορό των:

CTX-1, δείκτης οστικής απορρόφησης

PINP, δείκτης σχηματισμού οστού

ALP, δείκτης σχηματισμού οστού

2.4 Χρώση TRAP

Μετά τη στερέωση, τα μηριαία οστά ποντικού απασβεστοποιήθηκαν σε EDTA για 10 ημέρες. Στη συνέχεια αφυδατώθηκαν, ενσωματώθηκαν σε παραφίνη και παρασκευάστηκαν σε τμήματα των 6 μm.

Οι τομές υποβλήθηκαν σε αποκήρωση με ξυλόλιο, επανυδάτωση με αιθανόλη και χρώση TRAP. Στη συνέχεια, τα τμήματα αφυδατώθηκαν, καθαρίστηκαν και τοποθετήθηκαν.

2.5 Χρώση ανοσοϊστοχημείας (IHC).

Για την ανοσοϊστοχημεία Runx2, τομές 5 μm κόπηκαν με χρήση μικροτόμου, στη συνέχεια αποκηρώθηκαν και ενυδατώθηκαν.

Η ενδογενής υπεροξειδάση αποκλείστηκε με 0,3% υπεροξείδιο του υδρογόνου σε PBS για 30 λεπτά.

Για τη μείωση της μη ειδικής χρώσης, οι τομές επωάστηκαν για 1 ώρα σε PBS που περιείχε 10% φυσιολογικό ορό αλόγου και 0,1% Triton X-100.

Οι τομές επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4∘C4^\\circ C4∘C με πρωτεύον αντίσωμα anti-Runx2 σε αραίωση 1:1.000.

Στη συνέχεια, οι τομές πλύθηκαν με PBS και επωάστηκαν με βιοτινυλιωμένη IgG αντι-κατσίκας κουνελιού σε αραίωση 1:200 για 2 ώρες, ακολουθούμενη από επώαση με σύμπλοκο αβιδίνης-βιοτίνης-υπεροξειδάσης για 1 ώρα.

Η ανάπτυξη χρώματος αντιγόνου πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας διάλυμα τετραϋδροχλωρικής 3,3'-διαμινοβενζιδίνης που περιέχει 0,003% υπεροξείδιο του υδρογόνου. Διάλυμα αιματοξυλίνης χρησιμοποιήθηκε για αντιχρώση.

2.6 Ποσοτική RT-PCR σε πραγματικό χρόνο (qRT-PCR)

Το RNA εκχυλίστηκε χρησιμοποιώντας αντιδραστήριο TRIzol. Η ποσότητα του RNA σε κάθε δείγμα κανονικοποιήθηκε σε 1 ug για σύνθεση cDNA.

Το cDNA συντέθηκε χρησιμοποιώντας το RevertAid First Strand cDNA Synthesis Kit.

Το qRT-PCR πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τον ποσοτικό θερμικό κυκλωτή πραγματικού χρόνου Exicycler-96.

Οι παράμετροι ενίσχυσης ήταν:

Αρχική μετουσίωση στους 95∘C95^\\circ C95∘C για 5 λεπτά

40 κύκλοι PCR τριών σταδίων:

Μετουσίωσης στους 95∘C95^\\circ C95∘C για 1 λεπτό

Ανόπτηση στους 60∘C60^\\circ C60∘C για 30 δευτερόλεπτα

Τελική επέκταση στους 72∘C72^\\circ C72∘C για 1 λεπτό

Τα δεδομένα κανονικοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας GAPDH και αξιολογήθηκαν ως μέσες αλλαγές αναδίπλωσης. Η σχετική γονιδιακή έκφραση υπολογίστηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο 2−ΔΔCt2^{-\\Delta\\Delta Ct}2−ΔΔCt.

2.7 Ανάλυση Western Blot

Τα κύτταρα λύθηκαν χρησιμοποιώντας ρυθμιστικό διάλυμα λύσης RIPA που περιέχει αναστολείς πρωτεάσης και αναστολείς φωσφατάσης Ι και II.

Η συγκέντρωση πρωτεΐνης προσδιορίστηκε χρησιμοποιώντας το κιτ δοκιμασίας πρωτεΐνης Bio-Rad DC.

Ίσες ποσότητες πρωτεΐνης, 20 μg20 μg20 μg ανά λωρίδα, φορτώθηκαν σε γέλες ηλεκτροφόρησης γέλης 10% δωδεκυλοθειικού νατρίου-πολυακρυλαμιδίου (SDS-PAGE) και μεταφέρθηκαν σε μεμβράνες φθοριούχου πολυβινυλιδενίου Immobilon-P.

Οι μεμβράνες αποκλείστηκαν με 5% αποβουτυρωμένο γάλα για 1 ώρα και στη συνέχεια επωάστηκαν όλη τη νύχτα στους 4∘C4^\\circ C4∘C με πρωτογενή αντισώματα.

Μετά από πλύση τρεις φορές με αλατούχο διάλυμα ρυθμισμένο με Tris που περιείχε 0,1% Tween-20 (TBST), οι μεμβράνες επωάστηκαν με δευτερεύον αντίσωμα συζευγμένο με υπεροξειδάση χρένου αντι-ποντικού ή αντι-κουνελιού σε αραίωση 1:3.000 για 1 ώρα.

Οι πρωτεΐνες οπτικοποιήθηκαν με χημειοφωταύγεια χρησιμοποιώντας κιτ ECL.

2.8 Στατιστική Ανάλυση

Όλες οι πειραματικές δοκιμές πραγματοποιήθηκαν τουλάχιστον τρεις φορές.

Οι συγκρίσεις μεταξύ πολλαπλών ομάδων πραγματοποιήθηκαν χρησιμοποιώντας μονόδρομη ανάλυση διακύμανσης. Οι συγκρίσεις κατά ζεύγη μεταξύ των ομάδων διεξήχθησαν χρησιμοποιώντας τη δοκιμασία πολλαπλής σύγκρισης του Tukey.

Για τη στατιστική ανάλυση χρησιμοποιήθηκε το λογισμικό SPSS 14.0. Μια τιμή του P<0.05P < 0.05P<0.05 was considered statistically significant.

 

3. Αποτελέσματα

3.1 Επιδράσεις της Acteoside στο επίπεδο Ε2 ορού, το βάρος της μήτρας, το σωματικό βάρος και τον δείκτη μήτρας σε οστεοπορωτικά ποντίκια OVX

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 1, σε σύγκριση με την ψευδοχειρουργημένη ομάδα, τα ποντίκια στην ομάδα μοντέλου είχαν σημαντικά χαμηλότερα επίπεδα Ε2 ορού, βάρος μήτρας και δείκτη μήτρας, ενώ το σωματικό βάρος ήταν σημαντικά αυξημένο (Ρ<0.05P < 0.05P<0.05).

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, τα ποντίκια σε όλες τις ομάδες θεραπείας εμφάνισαν σημαντικά μειωμένο σωματικό βάρος (P<0.05P < 0.05P<0.05).

Σχήμα 1. Επιδράσεις της ακτεοσίδης στο επίπεδο Ε2 ορού, το βάρος της μήτρας, το σωματικό βάρος και τον δείκτη της μήτρας σε οστεοπορωτικά ποντίκια OVX

Α. Ομάδα που λειτουργεί με ψευδείς
Β. Πρότυπη ομάδα
Γ. Ομάδα οιστρογόνων
Δ. Ομάδα ακτεοσίδης χαμηλής δόσης
Ε. Ομάδα ακτεοσίδης υψηλής δόσης

Σημείωμα:
∗P<0.05*P < 0.05∗P<0.05 vs. sham-operated group;
#P < 0,05 έναντι ομάδας μοντέλων.
△P<0.05\triangle P < 0.05△P<0.05 vs. estrogen group;
▲P<0.05\blacktriangle P < 0.05▲P<0.05 vs. low-dose acteoside group.

 

3.2 Επιδράσεις της ακτεοσίδης στις οστικές ιστομορφομετρικές παραμέτρους σε οστεοπορωτικά ποντίκια OVX

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 2, σε σύγκριση με την ψευδοχειρουργημένη ομάδα, τα ποντίκια στην ομάδα μοντέλου εμφάνισαν σημαντικά μειωμένη BMD, BV/TV, Tb.N και Tb.Th, ενώ η Tb.Sp ήταν σημαντικά αυξημένη (P<0.05P < 0.05P<0.05).

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, όλες οι ομάδες θεραπείας εμφάνισαν σημαντικά αυξημένη BMD, BV/TV, Tb.N και Tb.Th, ενώ η Tb.Sp ήταν σημαντικά μειωμένη (P<0.05P < 0.05P<0.05).

Σχήμα 2. Επιδράσεις της ακτεοσίδης στις ιστομορφομετρικές παραμέτρους των οστών σε οστεοπορωτικά ποντίκια OVX

Α. Ομάδα που λειτουργεί με ψευδείς
Β. Πρότυπη ομάδα
Γ. Ομάδα οιστρογόνων
Δ. Ομάδα ακτεοσίδης χαμηλής δόσης
Ε. Ομάδα ακτεοσίδης υψηλής δόσης

Σημείωμα:
∗P<0.05*P < 0.05∗P<0.05 vs. sham-operated group;
#P < 0,05 έναντι ομάδας μοντέλων.
△P<0.05\triangle P < 0.05△P<0.05 vs. estrogen group;
▲P<0.05\blacktriangle P < 0.05▲P<0.05 vs. low-dose acteoside group.

 

3.3 Επιδράσεις της Ακτεοσίδης στους δείκτες που σχετίζονται με τον μεταβολισμό των οστών ορού σε οστεοπορωτικά ποντίκια OVX

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 3, σε σύγκριση με την ομάδα που χειρουργήθηκε ψευδώς, τα ποντίκια στην ομάδα μοντέλου εμφάνισαν σημαντικά μειωμένα επίπεδα PINP και ALP στον ορό, ενώ τα επίπεδα CTX-1 ήταν σημαντικά αυξημένα (Ρ<0.05P < 0.05P<0.05).

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, όλες οι ομάδες θεραπείας εμφάνισαν σημαντικά αυξημένα επίπεδα PINP και ALP στον ορό, ενώ τα επίπεδα CTX-1 μειώθηκαν σημαντικά (P<0.05P < 0.05P<0.05).

Εικόνα 3. Επιδράσεις της ακτεοσίδης στους δείκτες που σχετίζονται με τον μεταβολισμό των οστών ορού σε οστεοπορωτικά ποντίκια OVX

Α. Ομάδα που λειτουργεί με ψευδείς
Β. Πρότυπη ομάδα
Γ. Ομάδα οιστρογόνων
Δ. Ομάδα ακτεοσίδης χαμηλής δόσης
Ε. Ομάδα ακτεοσίδης υψηλής δόσης

Σημείωμα:
∗P<0.05*P < 0.05∗P<0.05 vs. sham-operated group;
#P < 0,05 έναντι ομάδας μοντέλων.
△P<0.05\triangle P < 0.05△P<0.05 vs. estrogen group;
▲P<0.05\blacktriangle P < 0.05▲P<0.05 vs. low-dose acteoside group.

Εικόνα 4. Επιδράσεις της ακτεοσίδης στον αριθμό των οστεοκλαστών στο μηριαίο οστό των οστεοπορωτικών ποντικών OVX (χρώση TRAP)

Α. Ομάδα που λειτουργεί με ψευδείς
Β. Πρότυπη ομάδα
Γ. Ομάδα οιστρογόνων
Δ. Ομάδα ακτεοσίδης χαμηλής δόσης
Ε. Ομάδα ακτεοσίδης υψηλής δόσης

Σχήμα 5. Επιδράσεις της ακτεοσίδης στην έκφραση της πρωτεΐνης Runx2 σε μηριαίο ιστό οστεοπορωτικών ποντικών OVX (IHC, ×400)

Α. Ομάδα που λειτουργεί με ψευδείς
Β. Πρότυπη ομάδα
Γ. Ομάδα οιστρογόνων
Δ. Ομάδα ακτεοσίδης χαμηλής δόσης
Ε. Ομάδα ακτεοσίδης υψηλής δόσης

Σχήμα 6. Επιδράσεις της ακτεοσίδης στην έκφραση mRNA ALP, OCN, Col1, NFATc1 και c-fos σε μηριαίο ιστό οστεοπορωτικών ποντικών OVX

Α. Ομάδα που λειτουργεί με ψευδείς
Β. Πρότυπη ομάδα
Γ. Ομάδα οιστρογόνων
Δ. Ομάδα ακτεοσίδης χαμηλής δόσης
Ε. Ομάδα ακτεοσίδης υψηλής δόσης

Σημείωμα:
∗P<0.05*P < 0.05∗P<0.05 vs. sham-operated group;
#P < 0,05 έναντι ομάδας μοντέλων.
△P<0.05\triangle P < 0.05△P<0.05 vs. estrogen group;
▲P<0.05\blacktriangle P < 0.05▲P<0.05 vs. low-dose acteoside group.

3.4 Επιδράσεις της ακτεοσίδης στον αριθμό των οστεοκλαστών στον μηριαίο ιστό των οστεοπορωτικών ποντικών OVX

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 4, σε σύγκριση με την ψευδοχειρουργημένη ομάδα, ο αριθμός των θετικών σε TRAP οστεοκλαστών στην ομάδα μοντέλου αυξήθηκε.

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, ο αριθμός των θετικών σε TRAP οστεοκλαστών μειώθηκε σε όλες τις ομάδες θεραπείας.

3.5 Επιδράσεις της ακτεοσίδης στην έκφραση της πρωτεΐνης Runx2 σε μηριαίο ιστό OVX οστεοπορωτικών ποντικών

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 5, σε σύγκριση με την ψευδοχειρουργημένη ομάδα, η θετική σε πρωτεΐνη Runx2 έκφραση στον μηριαίο ιστό μειώθηκε στην ομάδα μοντέλου.

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, η έκφραση θετικής πρωτεΐνης Runx2 στον μηριαίο ιστό αυξήθηκε σε όλες τις ομάδες θεραπείας.

3.6 Επιδράσεις της Ακτεοσίδης στην Έκφραση mRNA ALP, OCN, Col1, NFATc1 και c-fos σε μηριαίο ιστό OVX οστεοπορωτικών ποντικών

Όπως φαίνεται στο Σχήμα 6, σε σύγκριση με την ψευδοχειρουργημένη ομάδα, η έκφραση mRNA του μηριαίου ALP, OCN και Col1 ήταν σημαντικά μειωμένη στην ομάδα μοντέλου, ενώ η έκφραση mRNA NFATc1 και c-fos ήταν σημαντικά αυξημένη (Ρ<0.05P < 0.05P<0.05).

Σε σύγκριση με την ομάδα μοντέλου, όλες οι ομάδες θεραπείας έδειξαν σημαντικά αυξημένη έκφραση mRNA ALP, OCN και Col1, ενώ η έκφραση mRNA NFATc1 και c-fos ήταν σημαντικά μειωμένη (Ρ<0.05P < 0.05P<0.05).

 

Σχήμα 7. Επιδράσεις της ακτεοσίδης στην έκφραση πρωτεΐνης p-IκB και p-Akt σε μηριαίο ιστό οστεοπορωτικών ποντικών OVX

Α. Ομάδα που λειτουργεί με ψευδείς
Β. Πρότυπη ομάδα
Γ. Ομάδα οιστρογόνων
Δ. Ομάδα ακτεοσίδης χαμηλής δόσης
Ε. Ομάδα ακτεοσίδης υψηλής δόσης

Σημείωμα:
∗P<0.05*P < 0.05∗P<0.05 vs. sham-operated group;
#P < 0,05 έναντι ομάδας μοντέλων.
△P<0.05\triangle P < 0.05△P<0.05 vs. estrogen group;
▲P<0.05\blacktriangle P < 0.05▲P<0.05 vs. low-dose acteoside group.

 

4. Συζήτηση

Η οστεοπόρωση είναι μια κοινή μεταβολική ασθένεια των οστών που χαρακτηρίζεται από μειωμένη οστική πυκνότητα, καταστροφή της μικροδομής των οστών, αυξημένη ευθραυστότητα των οστών και αυξημένο κίνδυνο κατάγματος.

Περίπου 200 εκατομμύρια άνθρωποι παγκοσμίως πάσχουν από οστεοπόρωση. Με τη γήρανση του πληθυσμού, η υψηλή συχνότητα εμφάνισης και η θνησιμότητα επιβαρύνουν βαριά την κοινωνία.

Η μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση προκαλείται κυρίως από ανεπάρκεια οιστρογόνων και είναι ο πιο κοινός τύπος οστεοπόρωσης. Τα τυπικά χαρακτηριστικά του περιλαμβάνουν τη μείωση των επιπέδων οιστρογόνων και τη συνεχή απώλεια ασβεστίου με τη γήρανση.

Ο παθολογικός μηχανισμός της οστεοπόρωσης χαρακτηρίζεται από μειωμένη οστική μάζα και καταστροφή της μικροδομής της δοκιδωτής. Αυτό προκύπτει άμεσα από μια ανισορροπία μεταξύ του σχηματισμού οστεοκλαστών και σχηματισμού οστεοβλαστών [9].

Δεδομένης της σημαντικής επίδρασης της ανεπάρκειας οιστρογόνων στην οστεοπόρωση, αυτή η μελέτη χρησιμοποίησε ένα μοντέλο ποντικού που προκαλείται από ωοθηκεκτομή για να αξιολογήσει τις αντιοστεοπορωτικές επιδράσεις της ακτεοσίδης.

Πρώτον, αυτή η μελέτη επιβεβαίωσε ότι το OVX προκάλεσε ανεπάρκεια οιστρογόνων, ατροφία της μήτρας και απώλεια οστού σε ποντίκια, ενώ η εξωγενής συμπλήρωση Ε2 βελτίωσε την ατροφία της μήτρας και την απώλεια οστού σε ποντικούς OVX.

Επιπλέον, αυτή η μελέτη διαπίστωσε ότι η ακτεοσίδη δεν άλλαξε τα επίπεδα Ε2 στον ορό ή το βάρος της μήτρας σε ποντίκια OVX, αλλά βελτίωσε σημαντικά την οστική πυκνότητα και τη μικροδομή των οστών, βελτιώνοντας έτσι την οστική απώλεια.

Αυτό αντικατοπτρίστηκε από την αυξημένη BMD του μηριαίου, BV/TV, Tb.N και Tb.Th, καθώς και μειωμένη Tb.Sp.

Μεταξύ αυτών των παραμέτρων:

Η BMD αξιολογεί αποτελεσματικά τον βαθμό οστικής απώλειας.

Το BV/TV αντανακλά την σπογγώδη οστική μάζα.

Τα Tb.N, Tb.Sp και Tb.Th χρησιμοποιούνται κυρίως για την αξιολόγηση της χωρικής μορφολογίας του δοκιδωτού οστού [10].

 

Πώς το Acteoside μπορεί να υποστηρίξει την αναδόμηση των οστών

Η ανισορροπία μεταξύ του σχηματισμού οστού και της απορρόφησης των οστών θεωρείται κύριος μηχανισμός της οστεοπόρωσης.

Οι τρέχουσες θεραπείες οστεοπόρωσης περιλαμβάνουν κυρίως:

Αντι-απορροφητικά φάρμακα, όπως τα διφωσφονικά, τα οποία αναστέλλουν τη δραστηριότητα των οστεοκλαστών

Αναβολικοί παράγοντες, όπως η παραθυρεοειδική ορμόνη, που προάγουν τη λειτουργία των οστεοβλαστών

Αν και αυτά τα φάρμακα έχουν σαφή οφέλη για την υγεία των οστών, μπορεί επίσης να σχετίζονται με ανεπιθύμητες ενέργειες, όπως ναυτία, έμετο, πόνο στο στομάχι και αυξημένους κινδύνους που σχετίζονται με τον καρκίνο του μαστού και τον καρκίνο του ενδομητρίου [11].

Μια ιδανική στρατηγική οστεοπόρωσης θα ήταν μια ένωση με διπλή ρυθμιστική δράση και λιγότερες παρενέργειες: μια ένωση που μπορεί να αναστείλει τη διαφοροποίηση των οστεοκλαστών ενώ ενισχύει τη δραστηριότητα των οστεοβλαστών.

Αυτή η μελέτη διαπίστωσε ότι η ακτεοσίδη μείωσε τα επίπεδα CTX-1 στον ορό και αύξησε τα επίπεδα PINP και ALP στον ορό.

Το ALP και το PINP του ορού είναι δείκτες σχηματισμού οστού, ενώ το CTX-I είναι δείκτης οστικής απορρόφησης [12].

Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η ακτεοσίδη μπορεί να ρυθμίζει τον μεταβολισμό των οστών σε ποντίκια OVX προάγοντας τον σχηματισμό οστών και αναστέλλοντας την οστική απορρόφηση, δείχνοντας μια πιθανή διπλή ρυθμιστική επίδραση στην οστική ανανέωση.

 

Το Acteoside μπορεί να βοηθήσει στη μείωση της οστικής απορρόφησης που προκαλείται από οστεοκλάστες

Η ιστολογική ανάλυση έδειξε ότι η θεραπεία με ακτεοσίδη μείωσε τον αριθμό των θετικών σε TRAP κυττάρων, συγκεκριμένα των οστεοκλαστών, στο δοκιδωτό οστό κοντά στη μηριαία πλάκα ανάπτυξης των ποντικών OVX.

Αυτό υποδηλώνει ότι η ακτεοσίδη μπορεί να αναστείλει την επαγόμενη από το OVX ενεργοποίηση οστεοκλαστών.

Στο μικροπεριβάλλον των οστών, οι οστεοκλάστες είναι εξειδικευμένα πολυπύρηνα μακροφάγα που σχηματίζονται από τη διαφοροποίηση των μονοκυττάρων που προκαλούνται από το RANKL και τον παράγοντα διέγερσης αποικιών μακροφάγων.

Ο καταρράκτης σηματοδότησης που προκαλείται από το RANKL παίζει βασικό ρόλο στη ρύθμιση της δραστηριότητας των οστεοκλαστών. Αφού το RANKL συνδεθεί με τον υποδοχέα RANK του, στρατολογεί τον παράγοντα 6 που σχετίζεται με τον υποδοχέα TNF, ο οποίος ενεργοποιεί περαιτέρω την κατάντη οδό NF-κB.

Στην κλασική οδό NF-κB, το IκB συνδέεται με το NF-κB και εμποδίζει την πυρηνική του μετατόπιση. Κατά τη διαφοροποίηση των οστεοκλαστών, το IκB φωσφορυλιώνεται και αποικοδομείται, με αποτέλεσμα την ενεργοποίηση της οδού NF-κB.

Επιπλέον, το Akt παίζει σημαντικό ρόλο στη διαφοροποίηση των οστεοκλαστών [13]. Η διέγερση του RANKL και του M-CSF μπορεί να ενεργοποιήσει το Akt, το οποίο προάγει τον πυρηνικό εντοπισμό του NFATc1 μέσω φωσφορυλίωσης της κινάσης συνθάσης γλυκογόνου 3, προκαλώντας έτσι σχηματισμό οστεοκλαστών.

Η ενεργοποίηση του NF-κB και του Akt πυροδοτεί την έκφραση των βασικών παραγόντων διαφοροποίησης οστεοκλαστών c-fos και NFATc1. Αυτοί οι δύο βασικοί ρυθμιστές επηρεάζουν τη διαφοροποίηση των προδρόμων οστεοκλαστών σε ώριμους οστεοκλάστες ρυθμίζοντας την έκφραση των ειδικών για οστεοκλάστες γονιδίων.

Αυτή η μελέτη διαπίστωσε ότι η θεραπεία με ακτεοσίδη ανέστειλε την αποικοδόμηση της ΙκΒ στον μηριαίο ιστό ποντικών OVX, εμποδίζοντας έτσι την ενεργοποίηση της οδού NF-κB. Επίσης, μείωσε ειδικά τη φωσφορυλίωση Akt και ανέστειλε την έκφραση της πρωτεΐνης c-fos και NFATc1.

Αυτά τα αποτελέσματα υποδεικνύουν ότι η ακτεοσίδη μπορεί να αναστείλει τη διαφοροποίηση των οστεοκλαστών και να αποτρέψει την επαγόμενη από το OVX απορρόφηση των οστών μπλοκάροντας τις οδούς NF-κB και Akt και ρυθμίζοντας προς τα κάτω την έκφραση των NFATc1 και c-fos.

 

Το Acteoside μπορεί να προάγει τον σχηματισμό οστών που προκαλείται από οστεοβλάστες

Το Runx2 είναι ένας βασικός μεταγραφικός παράγοντας στο σχηματισμό οστών. Εκφράζεται μόνο σε οστεοβλάστες και μεταλλοποιημένους ιστούς και παίζει σημαντικό ρόλο στη διαφοροποίηση των οστεοβλαστών επάγοντας βασικά γονίδια δεικτών ειδικών για τους οστεοβλάστες, συμπεριλαμβανομένων των ALP, OCN και Col1 [14].

Μεταξύ αυτών:

Η ALP είναι ένας πρώιμος φαινοτυπικός δείκτης διαφοροποίησης οστεοβλαστών. Η δραστηριότητά του αντανακλά το αρχικό στάδιο της διαφοροποίησης των οστεοβλαστών και παίζει σημαντικό ρόλο στην ανοργανοποίηση των οστών με την έναρξη και/ή την προώθηση του σχηματισμού κρυστάλλων υδροξυαπατίτη σε κυστίδια μήτρας οστεοβλαστών.

Το OCN και το Col1 εκφράζονται στα τελευταία στάδια της διαφοροποίησης των οστεοβλαστών, που συνοδεύουν την έναρξη της ανοργανοποίησης της εξωκυτταρικής μήτρας [15].

Μέσω της ανοσοϊστοχημικής ανάλυσης, αυτή η μελέτη διαπίστωσε ότι η ακτεοσίδη αύξησε την έκφραση πρωτεΐνης του οστεογονικού δείκτη Runx2 στον μηριαίο ιστό, υποδηλώνοντας ότι μπορεί να προάγει τον σχηματισμό οστών σε ποντικούς OVX.

Ταυτόχρονα, παρατηρήθηκε μείωση των γονιδίων δεικτών ειδικών για οστεοβλάστες ALP, OCN και Col1 στον μηριαίο ιστό ποντικών OVX, ενώ η θεραπεία με ακτεοσίδη ανέστρεψε εν μέρει την επαγόμενη από την OVX καταστολή της ειδικής για οστεοβλάστες γονιδιακής μεταγραφής.

Αυτά τα αποτελέσματα υποδηλώνουν ότι η ακτεοσίδη μπορεί να προάγει την οστεογένεση ενισχύοντας τόσο τα πρώιμα όσο και τα όψιμα στάδια της διαφοροποίησης των οστεοβλαστών, υποστηρίζοντας έτσι τη διαφοροποίηση των οστεοβλαστών και την εναπόθεση ορυκτών.

 

Τι σημαίνει αυτό για άτομα που ενδιαφέρονται για φυτική υποστήριξη για την οστεοπόρωση

Για άτομα που αναζητούν φυτικές ή φυσικές προσεγγίσεις για την υποστήριξη της υγείας των οστών, αυτή η μελέτη προσφέρει μια ουσιαστική επιστημονική κατεύθυνση.

Το Acteoside δεν είναι απλώς ένα «συμπλήρωμα ασβεστίου». Αντίθετα, αυτή η έρευνα δείχνει ότι μπορεί να λειτουργήσει πιο βαθιά βοηθώντας στη ρύθμιση της ισορροπίας μεταξύ δύο σημαντικών τύπων οστικών κυττάρων:

Οστεοβλάστες, που χτίζουν τα οστά

Οστεοκλάστες, που διασπούν τα οστά

Τα υγιή οστά εξαρτώνται από την ισορροπία μεταξύ αυτών των δύο διεργασιών. Στην μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση, η οστική απορρόφηση συχνά γίνεται ισχυρότερη από τον σχηματισμό οστού, οδηγώντας σε σταδιακή απώλεια οστού.

Σύμφωνα με αυτή τη μελέτη σε ποντίκια, η ακτεοσίδη μπορεί να βοηθήσει στην αποκατάσταση αυτής της ισορροπίας με:

Υποστήριξη του σχηματισμού οστού που σχετίζεται με τους οστεοβλάστες

Μείωση της οστικής απορρόφησης που σχετίζεται με τους οστεοκλάστες

Βελτίωση της οστικής πυκνότητας και της δομής των δοκιδωτών οστών

Ρύθμιση βασικών μοριακών οδών που σχετίζονται με την αναδιαμόρφωση των οστών

Για πελάτες που ενδιαφέρονται για φυτικά προϊόντα για την υγεία των οστών, αυτό παρέχει μια πολλά υποσχόμενη ερευνητική βάση για βοτανικά πλούσια σε ακτεοσίδη, όπως το Rehmannia και το Cistanche.

Ωστόσο, είναι σημαντικό να είμαστε υπεύθυνοι και ρεαλιστές: αυτή η μελέτη πραγματοποιήθηκε σε ποντίκια και όχι σε ανθρώπους. Επομένως, η ακτεοσίδη δεν πρέπει να παρουσιάζεται ως αποδεδειγμένη θεραπεία για την ανθρώπινη οστεοπόρωση. Τα άτομα που έχουν διαγνωστεί με οστεοπόρωση θα πρέπει να συμβουλευτούν έναν εξειδικευμένο επαγγελματία υγείας, ειδικά εάν χρησιμοποιούν ήδη συνταγογραφούμενα φάρμακα ή θεραπεία που σχετίζεται με ορμόνες.

Ωστόσο, για όσους αναζητούν μια φυσική στρατηγική υποστήριξης των οστών, η ακτεοσίδη είναι μια ένωση που αξίζει να δοθεί προσοχή επειδή υποστηρίζεται από αναδυόμενη μηχανιστική έρευνα.

 

Σύναψη

Συνοπτικά, η ακτεοσίδη φαίνεται να ασκεί διπλή ρυθμιστική επίδραση στην αναδιαμόρφωση των οστών σε ποντικούς OVX.

Μπορεί να αναστείλει την οστική απορρόφηση που προκαλείται από οστεοκλάστες καταστέλλοντας την ενεργοποίηση της οδού NF-κB/Akt/NFATc1/c-fos.

Ταυτόχρονα, μπορεί να προάγει τον σχηματισμό οστού που καθοδηγείται από οστεοβλάστες ενεργοποιώντας τον άξονα Runx2/OCN/Col1.

Μέσω αυτών των μηχανισμών, η ακτεοσίδη βελτίωσε τις επαγόμενες από το OVX αυξήσεις στην οστική απορρόφηση και τις μειώσεις στον σχηματισμό οστών, συμβάλλοντας τελικά στη μείωση της οστικής απώλειας στα ποντίκια.

Ωστόσο, αυτή η έρευνα διεξήχθη μόνο σε ζωικό μοντέλο. Μελλοντικές μελέτες θα πρέπει να δημιουργήσουν αντίστοιχα κυτταρικά μοντέλα για να διερευνήσουν περαιτέρω πώς η ακτεοσίδη ρυθμίζει τη λειτουργία των οστεοβλαστών και των οστεοκλαστών in vitro. Απαιτούνται επίσης περισσότερες κλινικές μελέτες σε ανθρώπους προτού η ακτεοσίδη μπορεί να συσταθεί ως θεραπευτική επιλογή για την οστεοπόρωση.

Προς το παρόν, η ακτεοσίδη αντιπροσωπεύει μια πολλά υποσχόμενη φυσική ένωση για περαιτέρω ανάπτυξη στον τομέα της υγείας των οστών και της έρευνας που σχετίζεται με την οστεοπόρωση.

---

Αναφορές

[1] Καφέ JP. Μακροχρόνια θεραπεία της μετεμμηνοπαυσιακής οστεοπόρωσης.Endocrinol Metab (Σεούλ), 2021, 36(3): 544–552.

[2] Fischer V, Haffner-Luntzer M. Αλληλεπίδραση μεταξύ των οστών και των κυττάρων του ανοσοποιητικού: Επιπτώσεις για την μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση.Semin Cell Dev Biol, 2022, 123: 14–21.

[3] He Yuchi, Liu Ya. Διερεύνηση του μοριακού μηχανισμού του χαπιού Liuwei Dihuang στη θεραπεία της οστεοπόρωσης που σχετίζεται με το διαβήτη με βάση τη φαρμακολογία δικτύου και τη μοριακή σύνδεση.Παραδοσιακή Κινέζικη Ιατρική, 2025, 14(7): 6.

[4] Tan Xiaoyan, Li Xinhua, Chen Guanghua, et al. Κλινική αποτελεσματικότητα του χαπιού Liuwei Dihuang σε συνδυασμό με ζολεδρονικό οξύ στη θεραπεία της μετεμμηνοπαυσιακής οστεοπόρωσης.China Journal of Pharmaceutical Economics, 2024, 19(10): 47–51.

[5] Xiao Y, Ren Q, Wu L. Η φαρμακοκινητική ιδιότητα και η φαρμακολογική δραστηριότητα της ακτεοσίδης: Μια ανασκόπηση.Biomed Pharmacother, 2022, 153: 113296.

[6] Zhou Yu. Συστηματική αξιολόγηση και διερεύνηση κανόνων φαρμακευτικής αγωγής των συνταγών παραδοσιακής κινεζικής ιατρικής για την μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση και ο μηχανισμός της θεραπείας παρέμβασης Gujindan. Διατριβή. Changchun: Changchun University of Chinese Medicine, 2023.

[7] Wu Tingyu, Yu Pei, Liu Zhiqiang, et al. Μηχανισμός Qigu Capsule κατά της οστεοπόρωσης με βάση τη φαρμακολογία δικτύου.Εφημερίδα του Πανεπιστημίου Xinyu, 2021, 26(5): 29–37.

[8] Sun Qianhui. Μελέτη σχετικά με τις επιδράσεις του χάπι Zuogui και του χαπιού Yougui στην οστεογένεση, τη λιπογένεση και την απόπτωση μεσεγχυματικών βλαστοκυττάρων μυελού των οστών σε αρουραίους με ωοθηκεκτομή. Διατριβή. Shenyang: Πανεπιστήμιο Παραδοσιακής Κινεζικής Ιατρικής Liaoning, 2017.

[9] Zhang QY, Gong HB, Jiang MY, et al. Η ρύθμιση της ενζυμικής υπεροξείδωσης των λιπιδίων στους οστεοβλάστες προστατεύει από την μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση.Nat Commun, 2025, 16(1): 758.

[10] Wang Dongdong, Ren Weimin, Chen Kai, et al. Προγνωστική αξία παραμέτρων micro-CT για υποτροπή μετά από χειρουργική επέμβαση συμπιεστικού κατάγματος οστεοπορωτικής σπονδυλικής στήλης.Επιστήμη της Απεικόνισης και Φωτοχημεία, 2022, 40(1): 22–27.

[11] Brown JP. Μακροχρόνια θεραπεία της μετεμμηνοπαυσιακής οστεοπόρωσης.Endocrinol Metab (Σεούλ), 2021, 36(3): 544–552.

[12] Migliorini F, Maffulli N, Spiezia F, et al. Βιοδείκτες ως παρακολούθηση θεραπείας για μετεμμηνοπαυσιακή οστεοπόρωση: Συστηματική ανασκόπηση.J Orthop Surg Res, 2021, 16(1): 318.

[13] Udagawa N, Koide M, Nakamura M, et al. Διαφοροποίηση οστεοκλαστών με οδούς σηματοδότησης RANKL και OPG.J Bone Miner Metab, 2021, 39(1): 19–26.

[14] Gomathi K, Akshaya N, Srinaath N, et al. Ρύθμιση του Runx2 με μετα-μεταφραστικές τροποποιήσεις στη διαφοροποίηση των οστεοβλαστών.Life Sci, 2020, 245: 117389.

[15] Sharma AR, Lee YH, Gankhuyag B, et al. Επίδραση σωματιδίων αλουμίνας στην οστεογονική ικανότητα των οστεοβλαστών.J Funct Biomater, 2022, 13(3): 105.