Αφηρημένη: Οι πολυφαινόλες είναι γνωστά διατροφικά αντιοξειδωτικά. Πρόσφατα έχουν προσελκύσει σημαντικό ενδιαφέρον για χρήσεις για την πρόληψη της γήρανσης του δέρματος και της υπερμελάγχρωσης που προκύπτει από την ηλιακή ακτινοβολία UV. Τα φύλλα Prunus persica (L.) θεωρούνται υποπροϊόντα και αναφέρθηκε ότι έχουν αξιοσημείωτη αντιοξειδωτική δράση λόγω της υψηλής περιεκτικότητάς τους σε πολυφαινόλες. Αυτή η μελέτη στόχευε στην ανάπτυξη ενός καλλυντικού παρασκευάσματος κρέμας κατά της γήρανσης και λεύκανσης του δέρματος χρησιμοποιώντας αιθανολικό εκχύλισμα φύλλων Prunus persica (L.) (PPEE) φορτωμένο σε στερεά λιπιδικά νανοσωματίδια (SLNs) για την ενίσχυση της παροχής στο δέρμα. Η χημική διερεύνηση του PPEE έδειξε σημαντικά υψηλή περιεκτικότητα σε ολικά φαινολικά και φλαβονοειδή με αξιοσημείωτες αντιοξειδωτικές δράσεις (δοκιμές DPPH, ABTS και -καροτίνης). Ένας μοναδικός ακυλιωμένος γλυκοζίτης καμπφερόλης με σπάνια δομή, η καμπφερόλη 3-O- -4C1-(600 -O-3,4-διυδροξυφαινυλακετυλογλυκοπυρανοσίδη) ( KDPAG) απομονώθηκε για πρώτη φορά και η δομή του αποσαφηνίστηκε πλήρως. Αντιπροσωπεύει το πρώτο παράδειγμα ακυλίωσης με 3,{{10}}διυδροξυ φαινυλοξικό οξύ στη χημεία των φφλλαβονοειδών. Οι in vitro μελέτες κυτταροτοξικότητας έναντι κυτταρικής σειράς ανθρώπινων κερατινοκυττάρων αποκάλυψαν τη μη τοξικότητα των PPEE και PPEE-SLNs. Επιπλέον, τα PPEE, PPEE-SLNs και KDPAG έδειξαν καλή δράση κατά της ελαστάσης, συγκρίσιμη με εκείνη της Ν (Μεθοξυηλεκτρυλ)-Ala-Ala-Pro-Val-χλωρομεθυλκετόνης. Επιπλέον, τα PPEE-SLN και KDPAG έδειξαν σημαντικά (p < 0,001) υψηλότερες αντικολλαγενάσης και αντι-τυροσινάσης δραστικότητα σε σύγκριση με το EDTA και το κοτζικό οξύ, αντίστοιχα. Διαφορετικές φόρμουλες κρέμας PPEE-SLNs (2 τοις εκατό και 5 τοις εκατό) αξιολογήθηκαν για πιθανή αντιρυτιδική δράση κατά της φωτογήρανσης που προκαλείται από την υπεριώδη ακτινοβολία σε μοντέλο ποντικιού χρησιμοποιώντας μια μέθοδο βαθμολόγησης ρυτίδων και αποδείχθηκε ότι προσφέρουν ένα εξαιρετικά σημαντικό προστατευτικό αποτέλεσμα έναντι της υπεριώδους ακτινοβολίας, όπως αποδεικνύεται με ιστικούς βιοδείκτες (SOD) και ιστοπαθολογικές μελέτες. Έτσι, η τρέχουσα μελέτη καταδεικνύει ότι τα υποπροϊόντα φύλλων Prunus persica παρέχουν μια ενδιαφέρουσα, πολύτιμη πηγή για φυσικά συστατικά καλλυντικών. Αυτό παρέχει σχετικά δεδομένα για περαιτέρω μελέτη της πιθανής ασφαλούς χρήσης των PPEE-SLNs σε τοπικά αντιγηραντικά καλλυντικά σκευάσματα με ενισχυμένες ιδιότητες διείσδυσης του δέρματος.

Σύμφωνα με σχετικές μελέτες,κιστανάκιείναι ένα κοινό βότανο που είναι γνωστό ως «το θαυματουργό βότανο που παρατείνει τη ζωή». Το κύριο συστατικό του είναισιστανοζίτη, που έχει διάφορα αποτελέσματα όπως π.χαντιοξειδωτικό, αντιφλεγμονώδη, καιπροαγωγή της ανοσοποιητικής λειτουργίας. Ο μηχανισμός μεταξύ cistanche καιλεύκανση δέρματοςέγκειται στην αντιοξειδωτική δράση τουγλυκοσίδες κιστάνχης. Η μελανίνη στο ανθρώπινο δέρμα παράγεται από την οξείδωση της τυροσίνης που καταλύεται απότυροσινάσηκαι η αντίδραση οξείδωσης απαιτεί τη συμμετοχή οξυγόνου, έτσι οι ελεύθερες ρίζες στο σώμα γίνονται ένας σημαντικός παράγοντας που επηρεάζει την παραγωγή μελανίνης. Το Cistanche περιέχει cistanoside, το οποίο είναι ένα αντιοξειδωτικό και μπορεί να μειώσει τη δημιουργία ελεύθερων ριζών στο σώμα.αναστέλλοντας την παραγωγή μελανίνης.

Κάντε κλικ στο Συμπλήρωμα Cistanche για λεύκανση

Για περισσότερες πληροφορίες:

david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501

1. Εισαγωγή

Η γήρανση του δέρματος είναι μια σύνθετη πολυπαραγοντική προοδευτική διαδικασία που καταλύει τις φυσικές αλλαγές στο δέρμα και τον συνδετικό ιστό [1]. Διακρίνεται σε ενδογενή και εξωγενή γήρανση.

Η εξωτερική γήρανση του δέρματος προκύπτει κυρίως από περιβαλλοντικούς παράγοντες, όπως ρύπους, το κάπνισμα και το στρες της ζωής, ή κυρίως από την επανειλημμένη έκθεση στην υπεριώδη ακτινοβολία (φωτογήρανση) [2].

Η υπερβολική έκθεση στην υπεριώδη ακτινοβολία διεγείρει την υπερπαραγωγή ενεργών ειδών οξυγόνου (ROS) που οδηγεί σε ενδογενές οξειδωτικό στρες στους ιστούς του δέρματος που οδηγεί στην αποικοδόμηση των συστατικών της εξωκυτταρικής μήτρας (ECM). Η αποικοδόμηση της ECM συνδέεται άμεσα με τη γήρανση του δέρματος και είναι υπεύθυνη για την αύξηση της δραστηριότητας ορισμένων ενζύμων όπως η κολλαγενάση, η ελαστάση και η τυροσινάση που εμπλέκονται στη γήρανση του δέρματος. Αυτές οι δερματικές ενεργοποιήσεις ενζύμων προκαλούν μείωση των επιπέδων ελαστίνης και κολλαγόνου που οδηγεί σε απώλεια ελαστικότητας και αντοχής του δέρματος και εμφάνιση ρυτίδων [3]. Επίσης, η πρόκληση υπερβολικής παραγωγής μελανίνης και το μαύρισμα του δέρματος έχει ως αποτέλεσμα την υπερμελάγχρωση του δέρματος.

Ως εκ τούτου, η γήρανση του δέρματος μπορεί να αποτραπεί με αντιοξειδωτικά με δράση δέσμευσης ελεύθερων ριζών, η οποία μπορεί να έχει μεγάλη σημασία στην άμυνα και τη θεραπεία ασθενειών που σχετίζονται με την ηλικία και περιλαμβάνουν ROS [4]. Ο άλλος τρόπος επιβράδυνσης της γήρανσης είναι η χρήση αναστολέων ελαστάσης, κολλαγενάσης και τυροσινάσης που είναι πολύ ισχυροί υποψήφιοι για δραστηριότητες κατά των ρυτίδων και λεύκανσης του δέρματος, υποστηρίζοντας τη διατήρηση της ελαστικότητας του δέρματος και μπορεί να είναι μια κοινή προσέγγιση για την αντιμετώπιση διαταραχών μελάγχρωσης [5].

Έχει αναφερθεί ότι τα φυσικά αντιοξειδωτικά που απομονώνονται από φυτά μειώνουν τον κίνδυνο φωτογήρανσης που προκαλείται από την ακτινοβολία UV τόσο in-vitro όσο και in-vivo [6] και είναι προτιμότερα ως καλλυντικά συστατικά από τα συνθετικά αντιοξειδωτικά όσον αφορά το κόστος και τις παρενέργειες. Επιπλέον, πολλές in vitro και in-vivo μελέτες έχουν δείξει ότι οι φαινολικές ενώσεις όπως τα φαινολικά οξέα, τα φλαβονοειδή και οι τανίνες θα μπορούσαν να καθαρίσουν τις ελεύθερες ρίζες και να αναστείλουν τα ένζυμα ελαστάση, κολλαγενάση και τυροσινάση [7].

Έχει αναφερθεί η χρήση φυσικών αντιοξειδωτικών σε τοπικά παρασκευάσματα για την προστασία του δέρματος από το οξειδωτικό στρες που προκαλείται από εξωγενείς παράγοντες [8]. Ωστόσο, η πλειονότητα των αντιοξειδωτικών μορίων είναι εκ φύσεως ασταθή και μπορούν εύκολα να οξειδωθούν για να σχηματίσουν ανενεργές ενώσεις πριν φτάσουν στη θέση δράσης, γεγονός που καθιστά δύσκολη τη μορφοποίησή τους σε ένα κατάλληλο και σταθερό καλλυντικό προϊόν. Αυτά τα ευρήματα αποδεικνύουν την αναγκαιότητα μοναδικών συστημάτων χορήγησης για την ενίσχυση αυτών των αντιοξειδωτικών σκευασμάτων [9].

Διάφοροι παράγοντες επηρεάζουν τη διαπερατότητα των τοπικά εφαρμοζόμενων πολυφαινολών. η φαινολική υποκατηγορία, η δομή της, το μοριακό της μέγεθος και η μορφή γλυκοσιδίου ή αγλυκόνης, καθώς και τα άλλα συστατικά του σκευάσματος. Ωστόσο, η αλληλεπίδραση με τα συστατικά του δέρματος μέσω ενός μείγματος φυσικών και χημικών μεθόδων θα μπορούσε να βελτιώσει τη διαπερατότητα μέσω μιας αναστρέψιμης διαταραχής της δομής φραγμού του στρώματος της κεράτινης στιβάδας. Οι προσεγγίσεις ενθυλάκωσης είναι μία από τις μεθόδους ενίσχυσης της διαπερατότητας που χρησιμοποιούνται πιο συχνά για την εύκολη σταθεροποίηση των πολυφαινολικών κατά την αποθήκευση, αυξάνοντας τα αντιοξειδωτικά τους αποτελέσματα, τη δερματική απορρόφηση και τη διείσδυσή τους σε καλλυντικές και τοπικές θεραπείες. Οι πρόσφατα αναπτυγμένες τεχνολογίες ενθυλάκωσης περιλαμβάνουν νανογαλακτώματα, τρανσφεράσες, νανοσωματίδια στερεών λιπιδίων, νανοκρυστάλλους και ριβοσώματα [10].

Τα νανοσωματίδια στερεών λιπιδίων (SLNs) είναι ένα σταθερό σύστημα παροχής για προϊόντα δέρματος. Τα SLN θεωρούνται πολλά υποσχόμενοι φορείς φαρμάκων για τοπικά σκευάσματα λόγω της φωτοσταθερότητάς τους, των ιδιοτήτων ελεγχόμενης απελευθέρωσης, της αποφράξεως, των επιδράσεων κάλυψης της οσμής και της ενίσχυσης της διείσδυσης των ενεργών συστατικών μέσω του δέρματος αυξάνοντας την ενυδάτωσή του χωρίς σημάδια ερεθισμού του δέρματος, επιπλέον της απλότητας. παραγωγής, χαμηλής τοξικότητας και φυσικής σταθερότητας [9,11].

Σε παγκόσμια βάση, υπάρχουν περίπου 2000 ποικιλίες ροδάκινου [12]. Το Prunus (Rosaceae) είναι ένα διάσημο φυτικό γένος που περιλαμβάνει είδη πλούσια σε φαινολικά [13-15]. Ορισμένα είδη αυτού του γένους καλλιεργούνται στην Αίγυπτο για τους βρώσιμους καρπούς τους ή ως καλλωπιστικά [16].

Το Prunus persica (L.) Batch (PP) είναι ένα μικρό δέντρο με λεία κλαδιά και κοντό κορμό, απλωμένη, στρογγυλεμένη κορώνα [12] και καλλιεργείται συνήθως στη Δυτική Ασία, την Ευρώπη, την Ινδία και τη Βόρεια Αφρική [17]. Παραδοσιακά, τα φύλλα του έχουν χρησιμοποιηθεί ως διουρητικά, καθαρτικά, ιχνοκτόνα, εντομοκτόνα, ηρεμιστικά, για τον κοκκύτη, για τη θεραπεία του λευκοδερμίου και ως πυρετό [17]. Επιπλέον, φαρμακολογικές μελέτες σε φύλλα χαρακτήρισαν την in vivo αντιδιαβητική, σπασμωδική τους δράση, αντιφλεγμονώδη, αντιπηκτική, ηπατοπροστατευτική, ανθελονοσιακή, αντιασθματική και in vitro κυτταροτοξική, αντιμικροβιακή και ανασταλτική του νιτρικού οξειδίου με σημαντικές αντιοξειδωτικές δράσεις. [18-22].

Πολλές μελέτες έχουν γίνει για τη διερεύνηση του φαινολικού προφίλ των οπαδών της ΡΡ, των φρούτων και των σπόρων, τις αντιοξειδωτικές τους δραστηριότητες και τις φαρμακολογικές και θρεπτικές αξίες [13,14,23,24]. Ωστόσο, ήταν διαθέσιμα πολύ σπάνια δεδομένα για τα φύλλα. Μέχρι σήμερα, είναι διαθέσιμη μια ενιαία αναφορά που περιγράφει την απομόνωση πέντε γλυκοζιτών φλαβονόλης από ένα εκχύλισμα φύλλων αιθανόλης [25]. Επιπλέον, έχουν χαρακτηριστεί φαινολικές ενώσεις, συμπεριλαμβανομένων των φαινολικών οξέων και των φφλλαβονοειδών χρησιμοποιώντας ανάλυση HPLC-MS με τις φφλλαβονόλες ως κυρίαρχες ουσίες μεταξύ όλων των προσδιορισμένων ενώσεων [20,26].

Επιπλέον, αν και οι σπόροι, τα φρούτα, οι ακόλουθοι και άλλα είδη PP έχουν αναφερθεί ότι έχουν in-vivo προστατευτική δράση έναντι της επαγόμενης από την υπεριώδη ακτινοβολία φωτογήρανσης και in vitro αντιρυτιδικών και λεύκανσης του δέρματος δραστηριότητες [15,23,27-32], αυτό δεν έχει αναφερθεί ποτέ για εκχύλισμα φύλλων ΡΡ.

Μεγάλες ποσότητες φύλλων PP είναι υποπροϊόντα που προέρχονται από την καλλιέργεια ροδακινιάς και τις βιομηχανίες κονσερβοποίησης φρούτων [33]. Τα υποπροϊόντα των σπόρων ΡΡ, των φρούτων και άλλων ποικιλιών φύλλων έχουν αξιολογηθεί στα καλλυντικά και ως διαιτητικά τρόφιμα για πιθανή αξιοποίηση [32,34,35]. Ωστόσο, από όσο γνωρίζουμε, τα φύλλα υποπροϊόντα του PP var. Το Florida Prince δεν έχει ερευνηθεί ποτέ και θα μπορούσε να είναι μια ενδιαφέρουσα πηγή φυτοχημικών. Σε σύγκριση με άλλες βιομηχανίες, η αγορά καλλυντικών είναι πιο προσιτή και διευρυνόμενη και μπορεί να αποτελέσει πηγή αξιοποίησης των υποπροϊόντων [15]. Τα προϊόντα περιποίησης και γήρανσης του δέρματος είναι μερικές από τις πιο σημαντικές δυνατότητες καλλυντικών.

Σε μια συνέχεια της έρευνάς μας για τα πολυφαινολικά των βρώσιμων φυτών της Αιγύπτου [36] και δεδομένου ότι τα φύλλα PP θεωρούνται υποπροϊόντα και αναφέρθηκε ότι έχουν σημαντική αντιοξειδωτική δράση κυρίως λόγω της υψηλής περιεκτικότητάς τους σε φλαβονόλες, αυτή η μελέτη στοχεύει να υποβάλει το PPEE σε ένα εκτεταμένο φυτοχημικό ανάλυση του φαινολικού προφίλ του και να ενσωματώσει το PPEE σε φορτωμένα SLN ως ένα μοναδικό σύστημα χορήγησης στο δέρμα. Επιπλέον, το καλλυντικό δυναμικό αντιγήρανσης και λεύκανσης του δέρματος αξιολογήθηκε με τη διερεύνηση της in vitro αντιοξειδωτικής δράσης των PPEE, PPEE-SLNs και των απομονωμένων συστατικών, μαζί με την αξιολόγηση των ανασταλτικών τους επιδράσεων έναντι ενζύμων που σχετίζονται με το δέρμα. Εκτός από την ενσωμάτωση των PPEE-SLNs σε μια τοπική καλλυντική αντιγηραντική κρέμα και τη δοκιμή της ασφάλειας του προϊόντος καθώς και την αξιολόγηση της πιθανής in vivo αντιρυτιδικής δράσης των σκευασμάτων κρέμας PPEE-SLN κατά της φωτογήρανσης που προκαλείται από την υπεριώδη ακτινοβολία μοντέλο ποντικιού. Αυτό θα μπορούσε να παρέχει δεδομένα για περαιτέρω μελέτη της πιθανής χρήσης των φύλλων PPEE-SLN σε τοπικά σκευάσματα με ενισχυμένη διείσδυση στο δέρμα.

2. Υλικό και Μέθοδοι

2.1. Γενικός

2.2. Φυτικά Υλικά

2.3. Παρασκευή Φυτικού Εκχυλίσματος 

2.4. Προσδιορισμός της περιεκτικότητας σε ολικές πολυφαινόλες (TPC) 

Το αντιδραστήριο Folin–Ciocalteu όπως περιγράφεται από τους Li et al., [37] χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση της ποσότητας της συνολικής περιεκτικότητας σε φαινολικά σε PPEE, που παρουσιάζεται ως mg ισοδύναμου γαλλικού οξέος/g ξηρού εκχυλίσματος.

2.5. Προσδιορισμός ολικής περιεκτικότητας σε φλαβονοειδή (TFC)

Η χρωματομετρική μέθοδος χλωριούχου αργιλίου που περιγράφεται από τους Bahromun et al., [38] χρησιμοποιήθηκε για την εκτίμηση της συνολικής περιεκτικότητας σε φλαβονοειδή. Τα αποτελέσματα παρουσιάζονται ως mg ισοδύναμου κερσετίνης/g ξηρού εκχυλίσματος.

2.6. Κλασματοποίηση του PPEE και απομόνωση της ένωσης 1

2.7. Ταυτοποίηση καμπφερόλης 3-O- -4C1-(6"-O{-3,4-διυδροξυφαινυλακετυλογλυκοπυρανοσίδης) (1)

2.8. Μελέτες In-Vitro

Η κυτταρική σειρά ανθρώπινων κερατινοκυττάρων ελήφθη από την VACSERA CO. (The Egyptian Company for the Production of Vaccines, Sera, and Drugs, Giza, Egypt). Η ανάλυση MTT έγινε για PPEE και PPEE-SLNs σύμφωνα με τη μέθοδο των Mostafa et al. [36].

Ο προσδιορισμός DPPH πραγματοποιήθηκε χρησιμοποιώντας τη μέθοδο των Yardpiroon et al. [39] και η βιταμίνη C χρησιμοποιήθηκε ως θετικός μάρτυρας. Η ανάλυση ABTS ακολούθησε τη μέθοδο των Re et al., [40], η βιταμίνη C χρησιμοποιήθηκε ως πρότυπο. Η δοκιμασία λεύκανσης -καροτίνης χρησιμοποίησε τη μέθοδο που περιγράφεται από τους Soulef et al., [14] παρουσία του θετικού μάρτυρα BHT. Η τιμή για κάθε δείγμα δοκιμής παρουσιάστηκε ως καμπύλη αναστολής στο 50 τοις εκατό ή IC50.

Οι δραστηριότητες αντιγήρανσης και λεύκανσης του δέρματος αξιολογήθηκαν σύμφωνα με τις μεθόδους που αναφέρθηκαν από τους Mostafa et al. [41]. Για τον προσδιορισμό κατά της ελαστάσης, 1 μg/mL ελαστάσης ανθρώπινου λευκοκυττάρου επωάστηκε με ρυθμιστικό διάλυμα HEPES pH 7,5 και καθένα από τα εξετασθέντα εκχυλίσματα ή 1,4 mg/mL Ν-μεθοξυηλεκτρυλ-Αla-Αla-Προ-χλωρομεθυλκετόνη (τυπικός αναστολέας) σε μια πλάκα 96-πηγαδιού για 20 λεπτά σε θερμοκρασία δωματίου πριν από την προσθήκη 100 μL 1 mM Ν-μεθοξυηλεκτρυλ-Αla-Αla-Pro-Val-ρ-νιτροανιλιδίου ως υπόστρωμα. Μετά από 40 λεπτά επώασης, η απορρόφηση μετρήθηκε στα 405 nm με ένα φρεάτιο χωρίς εκχύλισμα/αναστολέα που χρησιμεύει ως τυφλό. Τα δείγματα που δοκιμάστηκαν χρησιμοποιήθηκαν σε εύρος συγκέντρωσης 25–300 μg/mL.

2.9. Διαμόρφωση και Χαρακτηρισμός PPEE-SLNs

Το σκεύασμα έγινε σύμφωνα με τη μέθοδο των Choubey et al. [11]. Αρχικά, το μονοστεατικό γλυκερύλιο διαλύθηκε σε ένα μίγμα χλωροφορμίου-μεθανόλης (1:1) και στη συνέχεια το αιθανολικό εκχύλισμα διασκορπίστηκε σε αυτό το διάλυμα. Αργότερα οι οργανικοί διαλύτες απομακρύνθηκαν χρησιμοποιώντας περιστροφικό εξατμιστήρα και το διάλυμα θερμάνθηκε. Στη συνέχεια προστέθηκε Tween 80 και το μίγμα αναδεύτηκε στις 3000 rpm για 30 λεπτά και στη συνέχεια ομογενοποιήθηκε για 4 ώρες πριν από τη διήθηση και την ξήρανση. Ο χαρακτηρισμός των PPEE-SLNs εξετάστηκε εκτιμώντας τη μορφολογία σχήματος και επιφάνειας, το μέγεθος των σωματιδίων, τον δείκτη πολυδιασποράς (PDI), την ανάλυση δυναμικού ζήτα, την αποτελεσματικότητα παγίδευσης ποσοστού (PEE) και τις μελέτες φασματοσκοπίας υπέρυθρου μετασχηματισμού Fourier (FT-IR).

2.10. Παρασκευή Φόρμουλες Τοπικής Κρέμας PPEE

Δύο σκευάσματα κρέμας (2 τοις εκατό & 5 τοις εκατό των PPEE-SLNs) παρασκευάστηκαν όπως φαίνεται στον Πίνακα 1 σύμφωνα με τη μέθοδο των Mahawar et al. [42].

Οι οργανοληπτικές ιδιότητες, το pH της κρέμας, οι μελέτες ικανότητας επάλειψης, η δοκιμή ιξώδους, η δοκιμή ομοιογένειας, η δοκιμή επιθέματος (δοκιμή Burchard), η in vitro εξέταση διαπερατότητας του δέρματος και οι μελέτες σταθερότητας (κατευθυντήριες γραμμές ICH) αξιολογήθηκαν σύμφωνα με τους Matangi et al. [43]. Πραγματοποιήθηκε δοκιμή μικροβιακού ορίου σύμφωνα με τους Sekar et al. [44].

2.11. In-Vivo Αντιρυτιδική Μελέτη Κρέμας PPEE-SLNs

Πενήντα αρσενικά άτριχα ποντίκια (HR{{{0}}) (4-εβδομάδων), 17–24 g ελήφθησαν από το VACSERA. Το πείραμα διεξήχθη μετά την έγκριση της επιτροπής δεοντολογίας του Οκτωβρίου University for Modern Sciences and Arts (MSA), το μέγεθος του δείγματος προσδιορίστηκε με αριθμό πρωτοκόλλου (PG1/EC1/2020PD) σύμφωνα με το λογισμικό (G. Power). Μία εβδομάδα πριν από την in-vivo μελέτη κατά των ρυτίδων, τα ποντίκια ήταν ελεύθερα να έχουν πρόσβαση σε τροφή και νερό και εγκλιματίστηκαν στο κλιματιζόμενο δωμάτιο (23 ± 2 ◦C). Τα ποντίκια (50) χωρίστηκαν σε πέντε ομάδες, τυχαία (n {= 10) όπως φαίνεται στον Πίνακα 2. Η θεραπεία έγινε σε 40 ημέρες, τρεις φορές την εβδομάδα, με 0,5 g κρέμας PPEE-SLNs ή οποιαδήποτε άλλη θεραπεία και εφαρμόστηκε στο ραχιαίο δέρμα ποντικών και στη συνέχεια εκτέθηκαν σε υπεριώδη ακτινοβολία (365 nm).

Πριν και μετά τις τοπικές θεραπείες, δύο φορές/εβδομάδα, λήφθηκαν φωτογραφίες δέρματος ραχιαίων ποντικών. Η κατάταξη των ρυτίδων του δέρματος αξιολογήθηκε χρησιμοποιώντας την οπτική κλίμακα ρυτίδων του Bissett [45]. Οι βάσεις για την κλίμακα βαθμολόγησης ήταν η υφή της ρυτίδας (λεπτή ή χονδροειδής) και η κεράτωση, χωρισμένη σε πέντε βαθμούς: χειρότερη (−2), ελαφρώς χειρότερη (−1), καμία αλλαγή (0), ελαφρώς βελτιωμένη ( συν 1) και βελτιώθηκε (συν 2).

Η ιστολογική αξιολόγηση έγινε σύμφωνα με τη μέθοδο των Elder et al. [46].

2.11.4. Δραστικότητα υπεροξειδίου δισμουτάσης (SOD).

Η δραστηριότητα SOD υπολογίστηκε σύμφωνα με τη μέθοδο των Ukeda et al. [47].

2.12. Στατιστική ανάλυση

3. Αποτελέσματα

3.1. Ολική περιεκτικότητα σε φαινολικά και φλαβονοειδή

Η TPC προσδιορίστηκε φασματοφωτομετρικά σε PPEE ως 387,5 ± 4,28 mg εκχυλίσματος GAE/g. Επίσης, ο TFC υπολογίστηκε ως 241,7 ± 3,25 mg QE/g εκχυλίσματος. Το PPEE έδειξε υψηλές συγκεντρώσεις φαινολικών και φφλλαβονοειδών ενώσεων. Και τα δύο αποτελέσματα ακολουθούν τιμές που αναφέρθηκαν προηγουμένως για εκχυλίσματα φύλλων ΡΡ, επιβεβαιώνοντας ότι τα φλαβονοειδή είναι τα κύρια χημικά συστατικά των φύλλων ΡΡ [20].

3.2. Απομόνωση και διαλεύκανση της δομής της καμπφερόλης

3-O- - 4C1-(600 -O-3,4-διυδροξυφαινυλακετυλογλυκοπυρανοσίδη), Ένωση 1

Μετά την ταξινόμηση όλων των γνωστών δομών σε αυτό το εκχύλισμα, η αναζήτηση για μοναδικές, δυνητικά βιολογικά ενεργές ενώσεις έγινε πιο αποτελεσματική. Σύμφωνα με τα ληφθέντα αναλυτικά δεδομένα 2-DPC, τα φαινολικά του PPEE βρέθηκαν να κλασματοποιούνται καλύτερα σε στήλη πηκτής MCI που εκλούεται από μείγματα MeOH/H2O φθίνουσας πολικότητας, μια διαδικασία που έδωσε τέσσερα κύρια κλάσματα στήλης. Ένα άμορφο υλικό διαχωρίστηκε από ένα θερμό συμπύκνωμα του κλάσματος III (εκροφήθηκε από τη στήλη με 70 τοις εκατό υδατικό MeOH) κατά τη διάρκεια της νύχτας σε ηρεμία σε θερμοκρασία δωματίου. Η κρυστάλλωση αυτού του υλικού δύο φορές από το βρασμό EtOH έδωσε μια χρωματογραφικά καθαρή καστανοκίτρινη άμορφη σκόνη 1. Έδειξε χρωματογραφικές ιδιότητες (σκούρο μωβ κηλίδα σε PC υπό υπεριώδες φως, γίνεται κίτρινο λεμόνι όταν καπνίζεται με ατμό αμμωνίας με μέτρια μετανάστευση σε υδατικά και οργανικά διαλύματα ) και χρωματικές αντιδράσεις (λεμονοκίτρινο χρώμα με αντιδραστήριο Naturstoff), οι οποίες πρότειναν ένα παράγωγο καμπφερόλης που φέρει μια ελεύθερη ομάδα 40 υδροξυλίου και μια θέση Ο-υποκατεστημένης 3-Ο. Τα φάσματα υπεριώδους ακτινοβολίας 1 σε MeOH (268 nm, 316 nm, 360 nm) και με την προσθήκη των αντιδραστηρίων διαγνωστικής μετατόπισης [48] ήταν τυπικά για αυτά της 3-Ο-γλυκοζυλιωμένης καμπφερόλης (θετική μετατόπιση με NaOAc, σταθερή μετατόπιση με NaOMe). Η κανονική όξινη υδρόλυση 1 (2 Ν υδατικό HCl, 3 ώρες, 100 ◦C) έδωσε γλυκόζη (συγκριτική χρωματογραφία χαρτιού, Co-PC), καεμπφερόλη και 3,4-διυδροξυφαινυλοξικό οξύ (UV απορρόφηση και φάσματα 1H-NMR, για μεμονωμένα δείγματα, που απομονώθηκαν με παρασκευαστικά χάρτινα χρωματογραφήματα του εκχυλίσματος οξικού αιθυλεστέρα του προϊόντος υδρόλυσης). Συνεπώς, το 1 είναι η καεμπφερόλη 3-Ο-(3,4-διυδροξυ φαινυλ ακετυλογλυκοσίδιο). Η ένωση ανακτάται αμετάβλητη μετά την επώαση με ένζυμο -γλυκοσιδάση για 24 ώρες, αποδεικνύοντας έτσι ότι το τμήμα γλυκοζυλίου είναι ακυλιωμένο. Ο μοριακός τύπος του 1 κατέληξε στο συμπέρασμα ότι είναι C29H26O14 από το αρνητικό φάσμα μάζας HRESI που έδειξε ένα ιόν [MH]− στο m/z=597.5302 (υπολογ. για C29H25O14, 597.5015). Το πείραμα ESI-MS (τρόπος λειτουργίας αρνητικού ιόντος) έδωσε μια κορυφή οιονεί μοριακού ιόντος [MH]- σε m/z: 597 υποδεικνύοντας ένα μοριακό βάρος 598 για 1. Περαιτέρω κορυφές ιόντων θραυσμάτων στο φάσμα ESI-MS-MS ήταν παρατηρήθηκε σε m/z: [MH]-: 447, 167 και 285 που αντιστοιχεί στην απώλεια οξικού διυδροξυφαινυλεστέρα από τη μητρική ένωση 1 ενώ τα ιόντα θραύσματος σε m/z 285 και m/z 167 αποδόθηκαν στην καμπφερόλη και τμήματα διυδροξυφαινυλοξικού οξέος, αντίστοιχα. Για να προσδιοριστεί η θέση σύνδεσης όλων των τμημάτων στο μόριο του 1 και για να επιτραπεί η πλήρης αντιστοίχιση όλων των συντονισμών άνθρακα και πρωτονίων, φασματοσκοπική ανάλυση NMR του 1, συμπεριλαμβανομένων 1D- 1H και 13C, και 2D- HSQC και HMBC , στη συνέχεια πραγματοποιήθηκε. Από τα πέντε σήματα στην περιοχή σακχάρου μεταξύ δ ppm 62,25 και 76,9 και από το σήμα ανωμερούς άνθρακα που βρίσκεται στα 99,13 ppm, αποδείχθηκε ότι το τμήμα σακχάρου πρέπει να συνδεθεί στη θέση 3 της καμπφερόλης επειδή αυτό το σήμα άνθρακα C-3 μετατοπίστηκε προς τα πάνω και τα αντίστοιχα σήματα ορθο και παρα-άνθρακα μετατοπίστηκαν προς τα κάτω (βλ. πειραματικό). Παρόμοιες αλλαγές είναι γνωστές από το έργο των Nawwar et al. [48]. Αυτό επιβεβαιώθηκε περαιτέρω από τις συσχετίσεις μακράς εμβέλειας 3 J που αναγνωρίζονται στο φάσμα HMBC, όπου βρέθηκε ένα διασταυρούμενο σήμα που συσχετίζει το ανωμερικό σήμα πρωτονίου γλυκόζης Η-100 στο δ 5,42 με τον άνθρακα της φλαβονόλης C{-3 σήμα στο δ 133,5. Η -διάταξη του τμήματος γλυκόζης προήλθε από τη χημική μετατόπιση C-100 στα 99,13 ppm. Οι τιμές χημικής μετατόπισης των ανθράκων σακχάρου επιβεβαίωσαν τη μορφή πυρανόζης αυτού του τμήματος [48]. Το φάσμα 1H-NMR του 1 ήταν επίσης από την προτεινόμενη δομή. Η χημική μετατόπιση του σήματος ανωμερούς πρωτονίου στα δ 5,42 ppm (d, J=8 Hz) έδειξε ότι ο ανωμερής άνθρακας είναι συνδεδεμένος με το τμήμα της καμπφερόλης στο C-3 (δppm 133,5) και την καθορισμένη σταθερά σύζευξης 8 Hz, να αποδείξετε τη -διαμόρφωση του τμήματος γλυκόζης. Η διαμόρφωση του τμήματος σακχάρου είναι 4C1 όπως ακολουθείται από τις -διαμορφώσεις που συζητήθηκαν παραπάνω.

Επίσης, η προσάρτηση του τμήματος 3,4-διυδροξυ φαινυλοξικού οξέος στο τμήμα C-600 μεθυλενογλυκοπυρανόζης ακολούθησε από τη μετατόπιση προς τα κάτω του σήματος αυτού του άνθρακα σε δ ppm 62,25 στο φάσμα 13C-NMR. Αυτό επιβεβαιώθηκε περαιτέρω από τη διασταυρούμενη κορυφή στο φάσμα HMBC, που συσχετίζει τα σήματα πρωτονίων μεθυλενικής γλυκόζης σε δ 4,04 (H-600 a) και δ 4,2 ppm (H-600 b) με τον άνθρακα καρβονυλίου του 3,4-μονάδα διθροξυφαινυλοξικού οξέος σε δ 176,26 ppm. Αυτά και τα παραπάνω δεδομένα επιβεβαίωσαν τελικά ότι η δομή της ένωσης 1 είναι η νέα καμπφερόλη 3-O- - 4C1-(600 -O{-3,{ {24}}διυδροξυφαινυλακετυλογλυκοπυρανοσίδη) (KDPAG), που αναφέρθηκε για πρώτη φορά στη φύση, καθώς αντιπροσωπεύει την πρώτη ακυλίωση με 3,4-υδροξυφαινυλοοξικό οξύ σε συνδυασμό με τη χημεία των φφλλαβονοειδών (Εικόνα 1).

Για περισσότερες πληροφορίες: david.deng@wecistanche.com WhatApp:86 13632399501