Μια προοπτική για την ανάπτυξη των αναστολέων της N-τερματικής κινάσης C-Jun ως θεραπευτικά για τη νόσο του Αλτσχάιμερ: Διερεύνηση της δομής μέσω μελετών σύνδεσης

Αφηρημένη:

Η N-τερματική κινάση c-Jun (JNK) παίζει σημαντικό ρόλο στον κυτταρικό θάνατο που προκαλείται από διάφορα ερεθίσματα. Επειδή η ισομορφή JNK3 εκφράζεται κυρίως στον εγκέφαλο, πιστεύεται ότι παίζει καθοριστικό ρόλο σε διάφορες νευροεκφυλιστικές ασθένειες, συμπεριλαμβανομένης της νόσου του Alzheimer (AD) και της νόσου του Parkinson (PD), οι οποίες εξακολουθούν να στερούνται εύλογης θεραπευτικής αγωγής. Για να αναπτύξουμε έναν νέο και επιλεκτικό αναστολέα JNK3, πραγματοποιήσαμε μια δεκαετία ανασκόπηση (2011 έως 2021) δημοσιευμένων άρθρων σχετικά με τους αναστολείς JNK, ιδιαίτερα εκείνων που εστιάζουν σε μια δομική προοπτική και σε εμπεριστατωμένες γνώσεις. Παρατηρήσαμε τις δομές τριών ισομορφών της JNK, δηλαδή τις ολο-πρωτεΐνες και τις συνκρυσταλλικές δομές, με αναστολείς JNK3 και συνοψίσαμε τις σημαντικές δομικές πτυχές των επιλεκτικών αναστολέων JNK3 ως θεραπευτικά AD.

Η νόσος του Πάρκινσον είναι μια κοινή εκφυλιστική ασθένεια του νευρικού συστήματος και τα κύρια συμπτώματά της περιλαμβάνουν τρόμο, ακαμψία, αργή κίνηση, διαταραχή ισορροπίας κ.λπ. Ωστόσο, τα προβλήματα στη λειτουργία της μνήμης που σχετίζονται με τα συμπτώματα της νόσου του Πάρκινσον τυγχάνουν αυξανόμενης προσοχής.

Μελέτες έχουν δείξει ότι η μνήμη των ασθενών με νόσο του Πάρκινσον επηρεάζεται σημαντικά κατά την εκτέλεση γνωστικών εργασιών, ενώ ορισμένοι από αυτούς εμφανίζουν επίσης έκπτωση της γνωστικής λειτουργίας, όπως απώλεια προσοχής και μειωμένη γνωστική ευαισθησία. Ωστόσο, αυτό δεν σημαίνει ότι τα άτομα με νόσο του Πάρκινσον δεν μπορούν να έχουν καλή μνήμη.

Τα άτομα με νόσο του Πάρκινσον μπορούν να βελτιώσουν τις μνημονικές τους δεξιότητες μέσω συνεχούς εξάσκησης και προπόνησης, ειδικά κάνοντας κάποιες ασκήσεις και ασκήσεις μνήμης. Αυτές οι ασκήσεις μπορούν να βοηθήσουν τα άτομα με νόσο του Πάρκινσον να βελτιώσουν τις γνωστικές τους ικανότητες, να αναπτύξουν μια πιο θετική αυτοπεποίθηση, να βελτιώσουν την ποιότητα ζωής τους και να βελτιώσουν την αυτοεκτίμησή τους.

Μεταξύ αυτών, μερικές απλές ασκήσεις μνήμης, συμπεριλαμβανομένης της πολλής ανάγνωσης, γραφής, μαθηματικών υπολογισμών, σχεδίασης και άλλων δραστηριοτήτων, μπορούν να βελτιώσουν αποτελεσματικά τη γνωστική ικανότητα των ασθενών με νόσο του Πάρκινσον και να τους κάνουν να αντιμετωπίσουν τη ζωή πιο θετικά και με αυτοπεποίθηση. Επιπλέον, κάποια εκπαίδευση μνήμης, συμπεριλαμβανομένης της μνήμης τοποθεσίας, της μνήμης αριθμών, της μνήμης γραμμάτων, της μνήμης ακολουθίας συμβάντων κ.λπ. είναι επίσης πολύ αποτελεσματική. Αυτές οι εκπαιδεύσεις δίνουν τη δυνατότητα στα άτομα με νόσο του Πάρκινσον να αντιμετωπίζουν και να αντιμετωπίζουν καλύτερα διάφορα προβλήματα και να προσαρμοστούν καλύτερα στη νέα κατάσταση της ζωής τους.

Συνολικά, αν και η νόσος του Πάρκινσον μπορεί να επηρεάσει την προσοχή και την ικανότητα μνήμης των ασθενών, η κατάλληλη γνωστική εκπαίδευση και άσκηση μπορούν να βοηθήσουν τους ασθενείς να βελτιώσουν τη γνωστική τους λειτουργία και να τους βοηθήσουν να προσαρμοστούν καλύτερα στη νέα κατάσταση ζωής τους. Επομένως, οι ασθενείς με νόσο του Πάρκινσον δεν χρειάζεται να φοβούνται προβλήματα μνήμης, εφόσον αντιμετωπίζουν τη ζωή με θετική και θετική στάση, σίγουρα θα έχουν μια ευτυχισμένη και δραστήρια ζωή. Μπορεί να φανεί ότι πρέπει να βελτιώσουμε τη μνήμη μας. Το Cistanche μπορεί να βελτιώσει σημαντικά τη μνήμη επειδή η πάστα κρέατος είναι ένα παραδοσιακό κινέζικο φαρμακευτικό υλικό με πολλά μοναδικά αποτελέσματα, ένα από τα οποία είναι η βελτίωση της μνήμης. Η αποτελεσματικότητα του κιμά προέρχεται από διάφορα ενεργά συστατικά, όπως καρβοξυλικό οξύ, πολυσακχαρίτες, φλαβονοειδή κ.λπ. Αυτά τα συστατικά μπορούν να προάγουν την υγεία του εγκεφάλου μέσω διαφόρων καναλιών.

Κάντε κλικ στο Μάθετε τρόπους για να βελτιώσετε τη λειτουργία του εγκεφάλου

Λέξεις-κλειδιά:

Η ασθένεια Αλτσχάϊμερ; C-Jun Ν-τελική κινάση; αναστολέας πρωτεϊνικής κινάσης μικρού μορίου. JNK3; εκλεκτικότητα.

1. Εισαγωγή

Οι πρωτεϊνικές κινάσες ανακαλύφθηκαν πριν από περισσότερα από 65 χρόνια, αλλά αποτελούν θεραπευτικούς στόχους για λιγότερο από 30 χρόνια [1,2]. Η εμπλοκή των πρωτεϊνικών κινασών σε πολλές ασθένειες έχει τεκμηριωθεί με βάση μεγάλο αριθμό μελετών και τέτοιες κινάσες αποτελούν από καιρό μια πολλά υποσχόμενη μοριακή ομάδα-στόχο. Υπάρχουν 518 γνωστές πρωτεϊνικές κινάσες που κωδικοποιούνται στο ανθρώπινο γονιδίωμα και οι πρωτεϊνικές κινάσες φωσφορυλιώνονται περίπου το ένα τρίτο όλων των πρωτεϊνών [3,4]. Πολλοί ερευνητές σε φαρμακευτικές εταιρείες και ακαδημαϊκό κόσμο έχουν εργαστεί σκληρά σε αυτόν τον τομέα, και ως αποτέλεσμα, 67 φάρμακα αναστολέων κινάσης μικρών μορίων έχουν εγκριθεί από τον FDA των ΗΠΑ από το 2021 [5].

Το Gleevec, μια καθιερωμένη θεραπεία για τη χρόνια μυελογενή λευχαιμία, ξεκίνησε το 2001 αφού αναπτύχθηκε από τη Novartis, ξεκινώντας την εποχή των αναστολέων της πρωτεϊνικής κινάσης. Αυτή η θεραπεία εξακολουθεί να επεκτείνει το φάσμα των εφαρμογών της. Μετά από αυτό, εννέα μικρομοριακοί αναστολείς πρωτεϊνικής κινάσης εγκρίθηκαν από τον FDA των ΗΠΑ το 2011 και στόχευαν αποκλειστικά σε πολλαπλασιαστικές ασθένειες όπως ο καρκίνος. Ομοίως, οι περισσότεροι αναστολείς πρωτεϊνικής κινάσης που έχουν εγκριθεί μέχρι τώρα χρησιμοποιούνται στην ογκολογία. Ωστόσο, οι πρωτεϊνικές κινάσες εμπλέκονται επίσης σε πολλές άλλες ασθένειες, συμπεριλαμβανομένων των φλεγμονωδών, ανοσολογικών και καρδιαγγειακών παθήσεων, καθώς και σε διαταραχές του κεντρικού νευρικού συστήματος (ΚΝΣ) όπως η νόσος του Alzheimer (AD) και η νόσος του Parkinson (PD) [6]. Το 2011, η ρουξολιτινίμπη, η οποία είναι αναστολέας JAK1 και JAK2, εγκρίθηκε ως θεραπευτικός παράγοντας για τη μυελοΐνωση. Μαζί με αυτήν την έγκριση, η έρευνα στον τομέα των μη ογκολογικών αναστολέων κινάσης έγινε ολοένα και πιο ενεργή [7]. Υπάρχουν έως και 10 φάρμακα που στοχεύουν ασθένειες εκτός της ογκολογίας μεταξύ των 67 εγκεκριμένων από το FDA αναστολείς πρωτεϊνικής κινάσης, αλλά δεν υπάρχει ακόμη φάρμακο αναστολέα πρωτεϊνικής κινάσης για διαταραχές του ΚΝΣ.

Η AD ανακαλύφθηκε το 1906 και μια μεταθανάτια εξέταση παρατήρησε δύο σαφείς βιοδείκτες, δηλαδή την πλάκα tau tangle και αμυλοειδές βήτα (A ), αλλά από το 2021, δεν έχει ακόμη εντοπιστεί ένας σαφής θεραπευτικός στόχος. Με την ταχεία γήρανση του παγκόσμιου πληθυσμού, οι νευροεκφυλιστικές ασθένειες όπως η ΝΑ έχουν γίνει μείζον κοινωνικό ζήτημα και έχουν σημαντικό αντίκτυπο όχι μόνο στους ασθενείς αλλά και σε άλλα άτομα γύρω από τους ασθενείς [8,9]. Επειδή οι μικρομοριακοί αναστολείς πρωτεϊνικής κινάσης χρησιμοποιούνται για ένα ευρύ φάσμα ασθενειών, οι μοριακοί στόχοι έχουν προσελκύσει σημαντική προσοχή στον τομέα των διαταραχών του ΚΝΣ. Από πολλές πιθανές πρωτεϊνικές κινάσες του ΚΝΣ, επιλέξαμε την N-τερματική κινάση c-Jun (JNK), ένα μέλος της οικογένειας πρωτεϊνικών κινασών που ενεργοποιούνται από μιτογόνο. Τα JNKs φωσφορυλιώνουν πολλαπλούς μεταγραφικούς παράγοντες που σχετίζονται με την απόπτωση, συμπεριλαμβανομένων των c-Jun, ATF, APP και tau, και προκαλούν κυτταρική απόπτωση [10].

Τα JNK ανταποκρίνονται σε διάφορα ερεθίσματα όπως οι κυτοκίνες, οι νευροτοξίνες, το οξειδωτικό στρες και τα λιπαρά οξέα. Όταν τα ερεθίσματα φτάσουν για πρώτη φορά στην κυτταρική μεμβράνη, τα σήματα μεταφέρονται σε ενεργοποιημένη από μιτογόνο πρωτεϊνική κινάση (MAPKKK), MAPKK4 και MAPKK7 μέσω φωσφορυλίωσης. Στη συνέχεια, τα ενεργοποιημένα MAPKK4 και MAPKK7 φωσφορυλιώνουν το JNK σε δύο διαφορετικές θέσεις και το φωσφορυλιωμένο JNK στη συνέχεια φωσφορυλιώνει το Ν-τελικό του c-Jun για να επάγει ένα αποπτωτικό σήμα [11]. Επιπλέον, η JNK φωσφορυλιώνει απευθείας τις αποπτωτικές πρωτεΐνες όπως οι BIM και BMF και τις ενεργοποιεί για να ενεργοποιήσουν τις κασπάσες [12]. Συνολικά, οι JNKs εμπλέκονται σε μεγάλο βαθμό στις φυσιολογικές διαδικασίες της απόπτωσης. Υπάρχουν τρία διαφορετικά ανθρώπινα γονίδια JNK, συγκεκριμένα τα jnk1, jnk2 και jnk3 που κωδικοποιούν 10 διαφορετικά ματίσματα παραλλαγών JNK (4 JNK1/2 ομόζυγα και 2 JNK3 ομόλογα), από τα οποία τα JNK1 και JNK2 είναι τα πιο ευρέως εκφρασμένα (Εικόνα 1).

Σε αντίθεση με τα JNK1 και JNK2, το JNK3 εκφράζεται κυρίως στον εγκέφαλο και μόνο ένα μικρό μέρος εκφράζεται στην καρδιά και τους όρχεις. Το JNK3 έχει θεωρηθεί ένας πιθανός θεραπευτικός στόχος για νευροεκφυλιστικές ασθένειες που σχετίζονται με θάνατο νευρωνικών κυττάρων. Όταν το c-Jun φωσφορυλιώνεται από το JNK3, διευκολύνει επίσης την ωρίμανση του tau tangle. Επιπλέον, το JNK3 είναι γνωστό ότι φωσφορυλιώνει απευθείας τις πρωτεΐνες tau, οδηγώντας στο σχηματισμό μπερδέματος ταυ.

Ένας άλλος βιοδείκτης της παθολογίας της AD, δηλαδή το αμυλοειδές βήτα, σχετίζεται επίσης με το JNK3. Το JNK3 φωσφορυλιώνει την πρόδρομη πρωτεΐνη αμυλοειδούς (APP) στο T688, προκαλώντας ενδοκυττάρωση APP, η οποία είναι γνωστό ότι είναι το πιο σημαντικό βήμα σε ολόκληρη τη διαδικασία σχηματισμού αμυλοειδούς-βήτα [13].

Ο μηχανισμός στον οποίο βρίσκεται η απόπτωση που προκαλείται από πλάκα παραμένει ασαφής. Οι πλάκες Α επάγουν τη φωσφορυλίωση της ενεργοποιημένης με AMP πρωτεϊνική κινάση (AMPK) και η ενεργοποιημένη ΑΜΡΚ φωσφορυλιώνει τα TSC2 και Raptor στα S1387 και S792. Αυτή η διαδικασία αναστέλλει την οδό mTOR και το αντιπροσωπευτικό σύστημα διάσωσης κυττάρων και επάγει ένα μεταφραστικό μπλοκ που εμποδίζει την έκφραση πρωτεΐνης [14]. Αυτό το φαινόμενο προκαλεί εκτεταμένο οξειδωτικό στρες του ενδοπλασματικού δικτύου, το οποίο συνοδεύεται από μια μη αναδιπλωμένη πρωτεϊνική απόκριση που προκαλεί δευτερογενείς αντιδράσεις όπως η φλεγμονώδης απόκριση, η οποία επανενεργοποιεί το JNK3. Μια άλλη λογική για την πρόβλεψη ότι ο θάνατος των νευρωνικών κυττάρων θα μειωθεί στους εγκεφάλους των ασθενών με AD όταν αναστέλλεται το JNK3 είναι ότι ο θάνατος των νευρωνικών κυττάρων και η γνωστική έκπτωση μειώθηκαν επίσης σε ένα μοντέλο ποντικού JNK3 knock-out FAD [15] (βλ. Εικόνα 2).

2. Τρέχουσα Κατάσταση Ανάπτυξης Αναστολέων JNK

2.1. Αναστολείς Pan-JNK

Ο SP600125 (Εικόνα 3) είναι ο πρώτος γνωστός αναστολέας pan-JNK με τιμές IC50 90, 40 και 40 nM για τα JNK3, JNK2 και JNK1, αντίστοιχα. Αυτή η ένωση ήταν ο πρώτος αναστολέας JNK που μελετήθηκε και η κατανόηση της ενδοκυτταρικής οδού σηματοδότησης της JNK έχει διευρυνθεί. Αρχικά, αναπτύχθηκε χρησιμοποιώντας καρκινικά κύτταρα ως δείκτες αποπτωτικού κυτταρικού θανάτου, αλλά αργότερα, αυτή η ένωση επέδειξε νευροπροστατευτική δράση σε μοντέλα ζώων PD που επάγεται από MPTP. Επίσης μείωσε τη νευροϊνιδιακή εμπλοκή και τις πλάκες Α σε ζωικά μοντέλα AD [16-18]. Η ισχύς και η επιλεκτικότητα του SP600125 δεν οδήγησε στην ανάπτυξη φαρμάκων, αλλά είναι μια ένωση που έχει κάνει πολλούς επιστήμονες να θεωρούν το JNK έναν ελκυστικό στόχο φαρμάκων.

Το AS602801 (Εικόνα 3) είναι ένας από του στόματος δραστικός αναστολέας pan-JNK. Οι τιμές IC50 230, 90 και 80 ηΜ παρουσιάζονται για τα JNK3, JNK2 και JNK1, αντίστοιχα. Επέδειξε σημαντική επίδραση στην ενδομητρίωση όταν χρησιμοποιήθηκε σε συνδυαστική θεραπεία με ορμόνες ή ως μονοθεραπεία σε μοντέλα μπαμπουίνων και τρωκτικών. Ενώ το AS602801 δεν είναι εκλεκτικός αναστολέας, έγινε μια προσπάθεια στόχευσης ασθενειών που σχετίζονται με το ανοσοποιητικό με τη θεραπεία AS602801, σε αντίθεση με το SP600125. Αυτή η ένωση εισήλθε σε κλινικές δοκιμές φάσης ΙΙ το 2012 με ένδειξη ενδομητρίωση [19,20].

Το Tanzisertib (Εικόνα 3) είναι ο τρίτος από του στόματος ενεργός αναστολέας pan-JNK, με τιμές IC50 6, 7 και 61 nM για τα JNK3, JNK2 και JNK1, αντίστοιχα. Η τανζισερτίμπη αποδείχθηκε αποτελεσματική σε πειράματα σε ζώα χρησιμοποιώντας ένα μοντέλο πνευμονικής ίνωσης που προκαλείται από μπλεομυκίνη ως νόσο-στόχο για την ιδιοπαθή πνευμονική ίνωση. Πειράματα έχουν επίσης δείξει ότι μειώνει την παραγωγή TNF- σε ένα μοντέλο PK-PD παραγωγής TNF-παραγωγής οξείας LPS επίμυος. Εισήλθε σε κλινικές δοκιμές φάσης ΙΙ με ένδειξη την ιδιοπαθή πνευμονική ίνωση, αλλά οι δοκιμές έχουν σταματήσει για άγνωστους λόγους [21].

2.2. Εκλεκτικοί αναστολείς JNK

Η ένωση 1 (Εικόνα 4) είναι ένας εκλεκτικός αναστολέας JNK3 με επίπεδα δραστικότητας από<1 nM for JNK3, 210 nM for JNK2, and 518 nM for JNK1. Unlike the pan-JNK inhibitors, it is characterized by isoform selectivity toward JNK3, which is mainly expressed in the brain. Therefore, it was developed to target Parkinson's disease [22]. Compound 2 (Figure 4) was synthesized from compound 1. It has a thiophenyl pyrazolone scaffold and selectivity for other kinases, as well as JNK1 and JNK2 isoforms. Its activity on JNK3 has an IC50 of 35 nM, and it exhibits a much better DMPK profile in vivo compared to previously reported JNK3 inhibitors (1 in Figure 4). It has also been demonstrated that this compound could be an orally available and blood-brain barrier (BBB)-penetrable [23].

Η ένωση 3 (Εικόνα 4) ανακαλύφθηκε μέσω εικονικής διαλογής βασισμένη σε δομή πολλαπλών σταδίων. Παρουσιάζει 40 nM IC50 για JNK3 και 2500-διπλάσια εκλεκτικότητα ισομορφής έναντι JNK1 και JNK2, καθώς και καλό προφίλ επιλεκτικότητας για 398 κινάσες. Επιδεικνύει επίσης μεγαλύτερη νευροπροστατευτική δράση έναντι της Α-επαγόμενης κυτταρικής τοξικότητας στα κύτταρα SH-SY5Y σε σύγκριση με το LiCl, το οποίο είναι ένας πιθανός θεραπευτικός παράγοντας για την AD in vitro. Μελέτες σε ζώα με χρήση ποντικών αποκάλυψαν αυξημένες ικανότητες μάθησης και μνήμης και μελέτες των υποκείμενων μηχανισμών αποκάλυψαν ότι αυτή η ένωση μπορεί να μειώσει σημαντικά τη διάχυση των πλακών ινωδών Α μέσω της αναστολής της JNK μετά τη μειωμένη φωσφορυλίωση των πρωτεϊνών APP και tau στον φλοιό και τον ιππόκαμπο. [24].

Η ένωση 4 (Σχήμα 4) είναι ένας επιλεκτικός αναστολέας JNK2- και JNK3- με τιμές IC50 16 nM για JNK3, 97 nM για JNK2 και 420 nM για JNK1. Η επιλεκτικότητα ισομορφής JNK2 δεν επιτεύχθηκε, αλλά η ένωση έδειξε υψηλή εκλεκτικότητα έναντι άλλων οικογενειών MAPK και ισομορφών JNK1. Ως αναστολέας JNK3 για τη θεραπεία νευροεκφυλιστικών ασθενειών, αυτή η ένωση επέδειξε ευνοϊκή διαπερατότητα BBB [25].

3. Ανάλυση Δομικής Προοπτικής του Active Site της JNK

3.1. Υπέρθεση κρυσταλλικών δομών JNK1, JNK2 και JNK3

Για να συγκριθούν οι δομές των JNK1 και JNK3, η ένωση 3 προσαρτήθηκε στο JNK3 (Protein Data Bank (PDB) ID: 4WHZ). Το ινδολίνο-2-ένα συστατικό βρίσκεται στην περιοχή της άρθρωσης και αλληλεπιδρά με το υδρογόνο της NH και το καρβονυλικό οξυγόνο στη ραχοκοκαλιά του Met149. Το άζωτο της θειαζόλης-4-ένας σχηματίζει δεσμό υδρογόνου με το Lys93 μέσω της γέφυρας νερού και η ομάδα 2-χλωρο-φαινυλίου θάβεται στον υδρόφοβο θύλακα που αποτελείται από Ile124, Leu126, Leu144, Val145, Met146, και Leu206, το οποίο βρίσκεται στο πίσω μέρος της ενεργής τοποθεσίας πέρα ​​από το υπόλειμμα θυρωρού Met146. Το Met146 αλληλεπιδρά με έναν αρωματικό δακτύλιο (στην ένωση 3, την 2-χλωρο-φαινυλ ομάδα) στο JNK3.

Όταν η συνδεδεμένη θέση της ένωσης 3 με JNK3 τοποθετήθηκε πάνω στις κρυσταλλικές δομές της JNK1 (PDB ID: 3PZE, 2XRW, 4QTD, 3ELJ, 4AWI και 4L7F) (Εικόνα 5), φάνηκε ότι κάθε υπόλειμμα Met108 στις δομές JNK1 που παρατηρήθηκε θα μπορούσε να έρχεται σε σύγκρουση με την ομάδα 2-χλωρο-φαινυλίου που καταλαμβάνει τον θύλακα επιλεκτικότητας, σε αντίθεση με τη μεθειονίνη146 του JNK3 [26]. Αυτή η σύγκρουση μεθειονίνης θα μπορούσε να εξηγήσει την επιλεκτικότητα της ένωσης 3 για το JNK3 έναντι του JNK1.

Για να προσδιοριστεί πώς δρα το υπόλειμμα θυρωρού μεθειονίνη108 στην ενεργό θέση του JNK2, η συνδεδεμένη θέση της ένωσης 3 τοποθετήθηκε σε τρεις δημοσιευμένες κρυσταλλικές δομές του JNK2 (PDB ID: 3E7O, 7CML και 3NPC) (Εικόνα 6). Αν και το Met108 στο 3E7O έρχεται σε σύγκρουση με την ομάδα 2-χλωρο-φαινυλίου που καταλαμβάνει τον θύλακα επιλεκτικότητας, το Met108 από 7CML και 3NPC αλληλεπιδρά με την ομάδα 2-χλωρο-φαινυλίου μέσω αλληλεπιδράσεων θείου-pi, παρόμοια με το Met14 η ενεργή τοποθεσία του JNK3 [32]. Είτε οι δύο δομές που σχηματίζουν αλληλεπιδράσεις θείου-pi είναι ολοένζυμα χωρίς συνκρυσταλλωμένους συνδέτες, είτε οι συνκρυσταλλωμένοι υποκαταστάτες έχουν ήδη αρωματικούς δακτυλίους που καταλαμβάνουν τον θύλακα επιλεκτικότητας. Στην κρυσταλλική δομή της ένωσης 4, η οποία έχει εκλεκτικότητα ισομορφής μόνο για το JNK1, το τμήμα ναφθαλίνης έχει αλληλεπίδραση θείου-pi με το υπόλειμμα Met146 του JNK3 και το IC50 του JNK2 είναι 97 nM, που είναι ένα λογικό επίπεδο δραστικότητας. Στην περίπτωση του alisertib, λαμβάνοντας υπόψη την κρυσταλλική δομή του alisertib στο JNK3 (δεν φαίνεται), η ομάδα τριφθοροφαινυλίου καταλαμβάνει τον θύλακα επιλεκτικότητας και αλληλεπιδρά με το Met146, αλλά η δραστηριότητα του JNK2 είναι σχεδόν ίδια με αυτή του JNK3. Συνδυάζοντας αυτές τις παρατηρήσεις, καταλήξαμε στο συμπέρασμα ότι η ένωση 4 προκαλεί το υπόλειμμα θυρωρού Met108 του JNK2 να κινείται επαρκώς για να σχηματίσει έναν υδρόφοβο θύλακα παρόμοιο με αυτόν του JNK3.

Η συμπεριφορά του υπολείμματος θυρωρού Methionine146 στην ενεργό θέση του JNK3 παρατηρήθηκε χρησιμοποιώντας την ίδια μέθοδο που περιγράφεται παραπάνω (Εικόνα 7). Οι ομάδες Met146 στις τέσσερις κρυσταλλικές δομές του JNK3 (PDB ID: 4WHZ, 4W4W, 3OY1, 7KSI) εμφανίζουν αλληλεπιδράσεις θείου-pi με τις 2-χλωρο-φαινυλικές ομάδες, εξαιρουμένων των δύο κρυσταλλικών δομών (PDB ID: 6EQ9, ) στα οποία οι συνκρυσταλλωμένοι συνδέτες δεν καταλαμβάνουν τον υδρόφοβο θύλακα [26-32]. Η επαγόμενη από την ένωση μετακίνηση των υπολειμμάτων μεθειονίνης στη δομή JNK2 και ο σχηματισμός ενός υδρόφοβου θύλακα είναι πιο συνηθισμένες στις δομές JNK3. Αυτή η τάση θα μπορούσε να εξηγήσει την εκλεκτικότητα ισομορφών των JNKs. Κανένα από τα υπολείμματα Met108 στις παρατηρούμενες κρυσταλλικές δομές του JNK1 δεν κινείται επαρκώς για να σχηματίσει έναν υδρόφοβο θύλακα, αλλά στις κρυσταλλικές δομές των JNK2 και JNK3, τα υπολείμματα μεθειονίνης κινούνται επαρκώς για να δημιουργήσουν υδρόφοβους θύλακες με τους αναστολείς. Ως εκ τούτου, η επιλεκτικότητα για το JNK1 μπορεί να επιτευχθεί μέσω υδρόφοβης κατάληψης τσέπης, αλλά η επιλεκτικότητα του JNK2 απαιτεί πρόσθετη εξήγηση.

3.2. Διαφορετικά υπολείμματα μεταξύ JNK1 και JNK3

Για τη διερεύνηση των υπολειμμάτων που περιλαμβάνουν την ενεργή θέση της JNK3, παρατηρήσαμε τις αλληλουχίες υπολειμμάτων 45 έως 400 της JNK3 και βρήκαμε ότι το υπόλειμμα Leu144 υπάρχει στην ενεργή θέση ως στοιχείο στον θύλακα επιλεκτικότητας. Το Leu144 σχηματίζει υδρόφοβες αλληλεπιδράσεις με τον δακτύλιο ναφθαλίνης της ένωσης 4 στην κρυσταλλική δομή του JNK3 (PDB ID: 3OY1) (Εικόνα 8a). Ωστόσο, όταν η κρυσταλλική δομή του JNK1 (PDB ID: 3PZE) υπερτίθεται στον συνκρυσταλλωμένο συνδετήρα του 3OY1 (Εικόνα 8β), το Ile106 υπάρχει στη θέση του υπολείμματος Leu144 στην ίδια θέση και συγκρούεται με τον δακτύλιο ναφθαλίνης της ένωσης 4 [37]. Η απόσταση μεταξύ του Leu144 στην κρυσταλλική δομή του JNK3 και του δακτυλίου ναφθαλίνης διατηρείται στα 3,53 Α, αλλά το Ile106 από την κρυσταλλική δομή του JNK1 προκαλεί κακή επαφή με τον δακτύλιο ναφθαλίνης επειδή είναι πολύ κοντά σε απόσταση 2,26 Α. Επειδή το JNK2 έχει επίσης Leu144 στην ίδια θέση με το JNK3, μπορούμε να συμπεράνουμε ότι η κατάληψη του θύλακα επιλεκτικότητας δεν είναι απόλυτη προϋπόθεση για την επίτευξη επιλεκτικότητας για τα JNK1 και JNK2.

4. Λειτουργικές ομάδες σε κάθε ένωση που συμβάλλουν στην εκλεκτικότητα ισομορφών

Για να προσδιορίσουμε τις δομικές ενδείξεις για την ένωση επιλεκτικού αναστολέα 1 στον τρόπο δέσμευσης, αναλύσαμε την ένωση 1-συμκρυσταλλικό σύμπλεγμα JNK3 λεπτομερώς (Εικόνα 9). Ένα ζεύγος δεσμών υδρογόνου σχηματίζεται στην περιοχή άρθρωσης Met149, η ομάδα NH του βενζαμιδίου δρα ως δότης δεσμού υδρογόνου και το 2-άζωτο στον δακτύλιο πυραζόλης δρα ως δέκτης δεσμών υδρογόνου. Ένας άλλος δεσμός υδρογόνου σχηματίζεται μεταξύ της ομάδας ουρίας και του Lys93 μέσω μιας γέφυρας νερού και η ομάδα 2-χλωρο-φαινυλίου βρίσκεται βαθιά στον υδρόφοβο θύλακα, σχηματίζοντας μια αλληλεπίδραση θείου-pi με το υπόλειμμα θυρωρού Met146. Η εισαγωγή του ορθο-υποκατεστημένου χλωριδίου φαίνεται να είναι σημαντική από την άποψη της επιλεκτικότητας επειδή αλλάζει τη γωνία των δύο δακτυλίων ως προς τη διαμόρφωση και αναγκάζει την ομάδα φαινυλίου να χωράει στον θύλακα επιλεκτικότητας [22]. Η πρωτονιωμένη πυρρολιδίνη στην περιοχή έκθεσης του διαλύτη σχηματίζει έναν δεσμό υδρογόνου με το Asn89 στο πάνω μέρος της ενεργού θέσης. Η ένωση 1 εμφανίζει 210-πλάσια επιλεκτικότητα για το JNK3 έναντι του JNK2, η οποία είναι πολύ υψηλότερη από αυτή των άλλων επιλεκτικών αναστολέων JNK3 που εξετάστηκαν. Ο δεσμός υδρογόνου μεταξύ πυρρολιδίνης και Asn89 είναι η πιο λογική εξήγηση για αυτό το φαινόμενο.

Μια παρόμοια παρατήρηση έγινε για την ένωση 2-συνκρυσταλλική δομή JNK3 (Εικόνα 10). Η ένωση 2 έχει επίσης δύο δεσμούς υδρογόνου με το Met149 στην περιοχή άρθρωσης, που σχηματίζεται από την ομάδα ΝΗ από το αμίδιο και το 2-άζωτο του δακτυλίου πυραζόλης. Ένας επιπλέον δεσμός υδρογόνου βρέθηκε στο τμήμα ουρίας με Lys93 μέσω της γέφυρας νερού. Η συνδεδεμένη με ουρία ομάδα 2-χλωροφαινυλίου εμφάνισε αλληλεπίδραση θείου-pi με το υπόλειμμα θυρωρού Met146 εντός του θύλακα επιλεκτικότητας και η υποκατάσταση ορθοχλωριδίου έκανε αυτή την αλληλεπίδραση πιο ευνοϊκή. Όλες αυτές οι αλληλεπιδράσεις ήταν πολύ παρόμοιες με τη σχέση της ένωσης 1 με το JNK3. Η μόνη διαφορά σε σύγκριση με τον τρόπο σύνδεσης της ένωσης 1 ήταν η απώλεια δεσμών υδρογόνου στο συστατικό έκθεσης σε διαλύτη, που φαίνεται να είναι ο λόγος για την αλλαγή στη δραστηριότητα του JNK3 (από<1 nM to 35 nM) and the decrease in selectivity compared to JNK2 (from 210- to 39-fold) [23]. However, compound 2 showed a superior pharmacokinetic profile in vivo compared to compound 1. Regardless, we believe that it is advantageous to maintain the hydrogen bond donor property in the solvent exposure component for the future design of selective JNK3 inhibitors.

Ο τρόπος δέσμευσης της ένωσης 3 εξετάστηκε για να διερευνηθεί η λογική για την ένωση 3 που εμφανίζει 2500-πλάσια επιλεκτικότητα έναντι του JNK2 (Εικόνα 11). Μια συνκρυσταλλική δομή δεν ήταν διαθέσιμη για την ένωση 3 και παρακολουθήσαμε τον τρόπο σύνδεσης μέσω προσομοιώσεων σύνδεσης. Όπως φαίνεται στο σχήμα 5, η ινδολίνη-2-ένα συστατικό βρίσκεται στην περιοχή της άρθρωσης, όπου υπάρχουν δύο δεσμοί υδρογόνου με το Met149, ένας δεσμός υδρογόνου με το Lys93 μέσω της γέφυρας νερού και η υδρόφοβη αλληλεπίδραση του {{11 }}χλωρο-φαινυλομάδα [24]. Εκτός από αυτές τις αλληλεπιδράσεις, διαπιστώσαμε ότι το 5-φθόριο της ινδολίνης-2-αλληλεπιδρά στενά με τα υπολείμματα Asn152 και Gln155 (αποστάσεις 4,69 Å και 3,41 Α, αντίστοιχα) μέσω δεσμού F. Αυτές οι αλληλεπιδράσεις είναι σαφείς με βάση τις διαφορές στη δραστηριότητα με και χωρίς υποκατάσταση φθορίου. Επιπλέον, η πλευρική αλυσίδα του Asn152 παρουσιάζει διπολική αλληλεπίδραση με την καρβονυλική ομάδα της θειαζόλης-4-one. Τόσο ο δεσμός F όσο και οι αλληλεπιδράσεις του διπόλου θα μπορούσαν να εξηγήσουν την υψηλή εκλεκτικότητα της ένωσης 3 για το JNK2.

Σε αντίθεση με την εκλεκτικότητα της ένωσης 3, εξετάσαμε τη χαμηλή εκλεκτικότητα της ένωσης 4 για να αναγνωρίσουμε τον τρόπο δέσμευσής της (Εικόνα 12). Έχει δύο δεσμούς υδρογόνου στην περιοχή της άρθρωσης και η καρβονυλική ομάδα της τριαζόλης-3-ο ένας σχηματίζει απευθείας δεσμό υδρογόνου με το Lys93, σε αντίθεση με τις προηγούμενες ενώσεις. Ο δακτύλιος ναφθαλίνης εισέρχεται στον θύλακα επιλεκτικότητας για να σχηματίσει υδρόφοβες αλληλεπιδράσεις και αλληλεπιδράσεις θείου-pi με τα υπολείμματα που περιγράφονται παραπάνω [25]. Αν και η ομάδα κυκλοεξανίου αντικαταστάθηκε στο συστατικό έκθεσης σε διαλύτη, δεν παρατηρήθηκαν πρόσθετες αλληλεπιδράσεις. Συμπερασματικά, οι ενώσεις με εκλεκτικότητα για το JNK2 εμφανίζουν συνήθως πρόσθετες αλληλεπιδράσεις με τη μορφή είτε δεσμών υδρογόνου, Fbonds είτε διπολικών αλληλεπιδράσεων στην έκθεση σε διαλύτες.

5. Συμπεράσματα

Οι νευροεκφυλιστικές ασθένειες όπως η ΝΑ γίνονται όλο και πιο κρίσιμα κοινωνικά προβλήματα με βάση τον ταχέως γηρασμένο παγκόσμιο πληθυσμό. Η ΝΑ είναι μια ασθένεια με τεράστιες ανεκπλήρωτες θεραπευτικές ανάγκες που απαιτούν νέους θεραπευτικούς μοριακούς στόχους. Όσον αφορά τους νέους θεραπευτικούς στόχους, διερευνήσαμε την N-τερματική κινάση 3 της c-Jun, η οποία είναι μια βασική πρωτεϊνική κινάση στη νευρωνική αποπτωτική διαδικασία. Το JNK παίζει σημαντικό ρόλο στην αποπτωτική διαδικασία στο τερματικό της οδού MAPK και η ισομορφή JNK3 εκφράζεται κυρίως στον εγκέφαλο. Ως εκ τούτου, θεωρείται ότι αποτελεί στόχο για νευροεκφυλιστικές ασθένειες, στις οποίες η απόπτωση των νευρώνων είναι βασικό γεγονός. Επιπλέον, επειδή το JNK3 εμφανίζεται επανειλημμένα σε αρκετές παθολογικές οδούς της AD, το θεωρήσαμε πολλά υποσχόμενο στόχο για την αντιμετώπιση αυτής της νόσου.

Ως εκ τούτου, συγκεντρώθηκε ένας ολοκληρωμένος κατάλογος των τρεχόντων αναστολέων pan-JNK και των επιλεκτικών αναστολέων JNK3 και εξετάστηκαν οι τρόποι δέσμευσής τους. Οι εκλεκτικοί αναστολείς JNK3 καταλαμβάνουν συνήθως μια υδρόφοβη περιοχή (Ile124, Leu126, Leu144, Val145, Met146 και Leu206) που ονομάζεται θύλακος επιλεκτικότητας εισάγοντας έναν αρωματικό δακτύλιο στον αναστολέα JNK3 έτσι ώστε να μπορεί να εισέλθει στην υδρόφοβη θέση του βαθέως JNK3 . Η επιλεκτικότητα για την ισομορφή JNK1 επιτεύχθηκε επιτρέποντας υδρόφοβες αλληλεπιδράσεις και αλληλεπιδράσεις θείου-pi. Έξι JNK1, τρεις JNK2 και έξι κρυσταλλικές δομές JNK3 επιλέχθηκαν σύμφωνα με τις αναλύσεις τους για να συγκριθούν οι κινήσεις των υπολειμμάτων gatekeeper Met που προκαλούνται από συνδέτη. Σε καθέναν από τους έξι συν-κρυστάλλους JNK1, η μεθειονίνη συγκρούστηκε με τον αρωματικό δακτύλιο στον επιλεκτικό αναστολέα JNK3 και κανένας από τους συνκρυσταλλωμένους συνδέτες δεν μπορούσε να χωρέσει στον υδρόφοβο θύλακα. Η σύγκρουση της μεθειονίνης του θυρωρού με τον αρωματικό δακτύλιο παρατηρήθηκε επίσης στον συνκρύσταλλο του JNK2, αλλά εάν ο συνκρυσταλλοποιημένος συνδετήρας καταλαμβάνει την υδρόφοβη περιοχή, τότε η μεθειονίνη του JNK2 προκαλείται από το πρόσδεμα και μπορεί να σχηματιστεί ένας θύλακας.

Μεταξύ των έξι παρατηρούμενων συν-κρυσταλλικών δομών αναστολέα-JNK3, υπήρξαν περισσότερες περιπτώσεις με συνδετήρες που καταλαμβάνουν τον υδρόφοβο θύλακα που διέπει αυτήν την επιλεκτικότητα. Τέσσερις συγκρυσταλλωμένοι συνδέτες κατέλαβαν τον υδρόφοβο θύλακα και δύο δεν κατέλαβαν τον υδρόφοβο θύλακα. Αν και παρατηρήθηκαν διαφορετικά επίπεδα κατοχής ανάλογα με τα σχήματα των τεσσάρων προσδεμάτων, όλες οι μεθειονίνες σχημάτισαν έναν υδρόφοβο θύλακα.

Ως συμπληρωματική εξήγηση για τα υπολείμματα που περιλαμβάνουν τον υδρόφοβο θύλακα βαθιά στην ενεργό θέση, υπάρχει μια διαφορά μεταξύ του Leu του JNK3 και του Ile του JNK1. Σε αντίθεση με το σχετικά κοντό Leu, το υπόλειμμα Ile του JNK1 εμποδίζει τους μεσαίους έως μεγάλους αρωματικούς δακτυλίους να εισέλθουν στον υδρόφοβο θύλακα.

Επειδή το υπόλειμμα λευκίνης βρίσκεται στον υδρόφοβο θύλακα του JNK2 καθώς και του JNK3, ο αρωματικός δακτύλιος στην υδρόφοβη περιοχή δεν έχει σημαντική επίδραση στην εκλεκτικότητα έναντι του JNK2. Σύμφωνα με αυτά τα αποτελέσματα, μπορεί κανείς να δει ότι απαιτούνται πρόσθετα στοιχεία για να ληφθεί εκλεκτικότητα ισομορφής για το JNK2 και μπορεί να γίνει κατανοητό ότι δεν υπάρχουν πολλοί αναστολείς που έχουν ξεπεράσει ακόμη αυτό το εμπόδιο.
Όσον αφορά τις δομές των επιλεκτικών αναστολέων JNK3 που είναι επίσης εκλεκτικοί για το JNK2, όλοι τους παρατηρήθηκε ότι εμφανίζουν πρόσθετη δέσμευση στο εκτεθειμένο σε διαλύτη τμήμα. Ένας επιλεκτικός αναστολέας JNK3, συγκεκριμένα η ένωση 1 (Εικόνα 9), σχηματίζει έναν δεσμό Η μεταξύ πρωτονιωμένης πυρρολιδίνης και Asn89, και ένας άλλος επιλεκτικός αναστολέας JNK3, συγκεκριμένα η ένωση 3, σχηματίζει επίσης έναν δεσμό F μεταξύ του φθορίου που υποκαθίσταται στην ινδολίνη{11 }}μία ομάδα και Asn152/Gln155. Αυτοί οι δεσμοί είναι όλοι πρόσθετες αλληλεπιδράσεις στην περιοχή έκθεσης σε διαλύτες. Επιπλέον, η καρβονυλική ομάδα της θειαζόλης-4-ένα στην ένωση 3 ήταν κοντά στο υπόλειμμα Asn152, το οποίο προβλέφθηκε ως αλληλεπίδραση διπόλου.

Μόλις επιτευχθεί η επιλεκτικότητα ισομορφής, υπάρχουν ακόμη πολλά εμπόδια που πρέπει να ξεπεραστούν. Πρώτα απ 'όλα, λόγω των ομοιοτήτων των θυλάκων δέσμευσης ΑΤΡ που στοχεύουν οι περισσότεροι αναστολείς πρωτεϊνικής κινάσης, θα πρέπει κατά προτίμηση να επιτυγχάνεται γενική επιλεκτικότητα έναντι ενός πρωτεϊνικού κινώματος εκτός του JNK1/2. Δεύτερον, θα απαιτηθεί υψηλή δραστικότητα επειδή η συγκέντρωση των θεραπευτικών ουσιών στο σώμα πρέπει να ανταγωνίζεται την ΑΤΡ, η οποία υπάρχει στη χιλιοστογραμμομοριακή περιοχή στα κύτταρα. Τρίτον, θα απαιτηθεί διείσδυση BBB χωρίς τη δημιουργία σημαντικών παρενεργειών, η οποία είναι η πιο δύσκολη πρόκληση αφού η ΝΑ, η ασθένεια που προσπαθούμε να κατακτήσουμε, είναι μια χρόνια ασθένεια και απαιτούνται θεραπείες για μακροχρόνια θεραπεία. Επομένως, σε ενδείξεις με τόσο μεγάλη περίοδο δοσολογίας, ένα ευρύ προφίλ ασφάλειας γίνεται πολύ σημαντικό ζήτημα. Αν και η ανάπτυξη των αναστολέων JNK3 ως θεραπεία για νευροεκφυλιστικές ασθένειες δεν ήταν ακόμη επιτυχής, γίνεται σαφές ότι το JNK3 είναι ένας πολλά υποσχόμενος θεραπευτικός στόχος.

Το JNK3 προσελκύει όλο και μεγαλύτερη προσοχή ως θεραπευτικός στόχος για την AD. Αυτά τα χαρακτηριστικά θα πρέπει να λαμβάνονται υπόψη στο σχεδιασμό νέων αναστολέων JNK3, οι οποίοι θα μπορούσαν να διευκολύνουν την ανάπτυξη ισχυρών και εκλεκτικών αναστολέων JNK3 ως θεραπευτικά για την AD σύντομα.

Χρηματοδότηση:

Αυτή η έρευνα χρηματοδοτήθηκε από το Εθνικό Ίδρυμα Ερευνών της Κορέας που χορηγεί NRF-2020R1A6A1A03042854 (Κέντρο Πρωτεϊνοπάθειας) και NRF-2021R1A2C2007159 (J.-M. Hah).

Δήλωση του Συμβουλίου Θεσμικής Αναθεώρησης:

Δεν εφαρμόζεται.
Δήλωση ενημερωμένης συναίνεσης:

Δεν εφαρμόζεται.

Σύγκρουση συμφερόντων:

Οι συγγραφείς δεν έχουν να δηλώσουν σύγκρουση συμφερόντων.

βιβλιογραφικές αναφορές

1. Burnett, G.; Kennedy, EP Η ενζυματική φωσφορυλίωση των πρωτεϊνών. J. Biol. Chem. 1954, 211, 969–980. [CrossRef]

2. Αμερικανική Υπηρεσία Τροφίμων & Φαρμάκων. Διαθέσιμο στο διαδίκτυο: https://www.fda.gov/drugs/drug-approvals-and-databases/compilationcder-new-molecular-entity-nme-drug-and-new-biologic-approvals (πρόσβαση στις 14 Σεπτεμβρίου 2021).

3. Ficarro, SB; McClelland, ML; Stukenberg, PT; Burke, DJ; Ross, MM; Shabanowitz, J.; Hunt, DF; Λευκό, ανάλυση φωσφοπρωτεώματος FM με φασματομετρία μάζας και εφαρμογή του σε Saccharomyces cerevisiae. Nat. Biotechnol. 2002, 20, 301–305. [CrossRef]

4. Cohen, P. Η ρύθμιση της πρωτεϊνικής λειτουργίας με φωσφορυλίωση πολλαπλών θέσεων — Μια 25-ετής ενημέρωση. Trends Biochem. Sci. 2000, 25, 596-601. [CrossRef]

5. Roskoski, RJ Ιδιότητες των εγκεκριμένων από την FDA αναστολέων κινάσης μικρών μοριακών πρωτεϊνών: Μια ενημέρωση του 2021. Pharmacol. Res. 2021, 165, 105463. [CrossRef]

6. Muller, S.; Chaikuad, Α.; Γκρι, NS; Knapp, S. Τα μέσα και τα έξω της ανάπτυξης επιλεκτικού αναστολέα κινάσης. Nat. Chem. Biol. 2015, 11, 818–821. [CrossRef]

7. Cohen, Ρ.; Alessi, DR Kinase ανακάλυψη φαρμάκου — Τι ακολουθεί στο πεδίο; ACS Chem. Biol. 2013, 8, 96–104. [CrossRef]

8. Μικρό, DH; Cappai, R. Alois Alzheimer και νόσος Alzheimer: Μια εκατονταετία προοπτική. J. Neurochem. 2006, 99, 708-710. [CrossRef] [PubMed]

9. Nichols, Ε.; Szoeke, CEI; Volset, SE; Abbasi, Ν.; Abd-Allah, F.; Abdela, J.; Aichour, MTE; Akinyemi, RO; Alahdab, F.; Asgedom, SW; et al. Παγκόσμια, περιφερειακή και εθνική επιβάρυνση της νόσου του Αλτσχάιμερ και άλλων άνοιων, 1990–2016: Μια συστηματική ανάλυση για τη μελέτη του παγκόσμιου φορτίου της νόσου 2016. Lancet Neurol. 2019, 18, 88–106. [CrossRef]

10. Derijard, Β.; Hibi, Μ.; Wu, IH; Barrett, Τ.; Su, Β.; Deng, Τ.; Karin, Μ.; Davis, RJ JNK1: Μια πρωτεϊνική κινάση που διεγείρεται από το υπεριώδες φως και το Ha-Ras που δεσμεύει και φωσφορυλιώνει την περιοχή ενεργοποίησης c-Jun. Cell 1994, 76, 1025-1037. [CrossRef]

11. Johnson, GL; Nakamura, K. The c-jun kinase/stress-activated pathway: ρύθμιση, λειτουργία και ρόλος στην ανθρώπινη ασθένεια. Biochim. Biophys. Acta ΜοΙ. Cell Res. 2007, 1773, 1341–1348. [CrossRef] [PubMed]

12. Okazawa, Η.; Estus, S. The JNK/c-Jun cascade and Alzheimer's disease. Είμαι. J. Alzheimer's Dis. Άλλη παράνοια. 2002, 17, 79–88. [CrossRef]

13. Bruckner, SR; Tammariello, SP; Kuan, CY; Flavell, RA; Rakic, P.; Ο Estus, S. JNK3 συμβάλλει στην ενεργοποίηση και την απόπτωση του c-Jun αλλά όχι στο οξειδωτικό στρες σε συμπαθητικούς νευρώνες που στερούνται νευρικού αυξητικού παράγοντα. J. Neurochem. 2001, 78, 298-303. [CrossRef]

14. Gwinn, DM; Shackelford, DB; Egan, DF; Mihaylova, MM; Mery, Α.; Vasquez, DS; Turk, BE; Shaw, RJ AMPK φωσφορυλίωση αρπακτικών διαμεσολαβεί ένα μεταβολικό σημείο ελέγχου. ΜοΙ. Cell 2008, 30, 214-226. [CrossRef]

15. Yoon, SO; Park, DJ; Ryu, JC; Ozer, HG; Tep, C.; Shin, YJ; Lim, TH; Pastorino, L.; Kunwar, AJ; Walton, JC; et al. Το JNK3 διαιωνίζει το μεταβολικό στρες που προκαλείται από ένα πεπτίδιο. Neuron 2012, 75, 824–837. [CrossRef]

For more information:1950477648nn@gmail.com